湖南体液外泌体透射电镜检测

外泌体特指直径在30-150nm的囊泡，其主要来源于细胞内多囊泡体，经多囊泡体外膜与细胞膜融合后释放到胞外基质中。外泌体膜上富含参与外泌体运输的四跨膜蛋白家族（CD63, CD81 和CD9）、热休克蛋白家族（HSP60, HSP70和HSP90），本示踪病毒使用CD9作为生物标记，通过将CD9与荧光蛋白偶联，带荧光的膜蛋白会在表达至外泌体膜上，便于后续进行、观察内化或其他实验。携带有外源基因的慢病毒载体在慢病毒包装质粒、细胞系的辅助下，经过病毒包装成为有ganran力的病毒颗粒，通过ganran细胞或组织，实现外源基因在细胞或组织中表达。 来源于ai细胞的外泌体对自然杀伤细胞具有细胞毒性作用。湖南体液外泌体透射电镜检测

通过对28例前列腺ai症患者和19例正常人尿液外泌体中的miRNA进行深度测序分析，发现两种miRNA(miR-196a-5p和miR-501-3p)在前列腺ai患者组明显下调，表明尿液外泌体中的特异性miRNA可能作为前列腺ai的新型生物标志物。Khurana等［100］将研究对象由miRNAs扩大至多种类型RNA，通过对慢性肾病患者尿液外泌体中各类RNA进行系统研究，在慢性肾病患者组中识别出30种明显差异的lncRNAs，表明尿液外泌体中的lncRNAs具有作为慢性肾病早期诊断标志物的潜力。Skotland等的研究则表明尿液外泌体中的脂质能够作为前列腺ai的新型标志物，3种脂质标志物结合使用能够有效提高对前列腺ai的诊断灵敏度(93%)和特异性(100%)。湖南外泌体示踪外泌体能向病变细胞输送功能性物质，所以有很大潜力作为基因和药物递送的载体。

利用蛋白质免疫印迹和酶联免疫吸附分析技术可以对外泌体标志性蛋白质进行定性定量分析。其中蛋白免疫印迹是外泌体的经典表征手段之一，操作时往往需要细胞裂解液作为阴性对照。常用的外泌体标志性蛋白质包括四跨膜蛋白质CD63、CD81、CD9、中流易感基因101蛋白(TSG101)、水通道蛋白2(AQP2，尿液中)和凋亡诱导因子6相互作用蛋白(Alix)等，内参蛋白质可以是肌动蛋白(βActin)或甘油醛－3-磷酸脱氢酶，阴性对照蛋白可以是阻抑素(PHB，线粒体标志蛋白)或钙联结蛋白Calnexin。在酶联免疫吸附析法中，外泌体裂解液通过固载有抗体的固相基质，随后与检测抗体共孵育。两种方法均存在操作繁琐、耗时长的问题，相比较而言，酶联免疫吸附分析法比蛋白质免疫印迹法更加快速，适用于高通量分析。

外泌体可以由体内或体外培养的几乎所有类型的细胞分泌, 并广fan存在于血浆、胆汁、尿液、母乳、唾液、胸腔积液、淋巴、胃酸、支气管肺泡灌洗液、脑脊液、眼泪、滑膜液、羊水、腹水、鼻分泌物和子宫抽吸物液体等体液中。目前, 基于不同的分离原理, 研究者建立了五种主要的提取纯化技术, 分别为基于质量密度的超速离心技术、基于粒径大小的分离技术、基于溶解性质的聚合物沉淀技术、基于免疫亲和原理的分离技术和基于流体性质的微流控技术。CD4+T细胞产生的外泌体具有免疫调节的作用。

通过改变外泌体的溶解性或者分散性, 可以将它们从体液或细胞培养液中沉淀出来。常见的方法是使用聚乙二醇或凝集素来沉淀样品中的外泌体。聚乙二醇是一种水溶性非离子化合物, 不含水的聚乙二醇可以通过“劫持”水分子增加疏水性蛋白和脂质分子的相互结合力, 从而迫使其脱离溶液, 进而在低速离心条件下发生沉降。凝集素是一种具有高度特异性的碳水化合物结合蛋白, 可通过与外泌体质膜糖蛋白上的糖链结合来改变外泌体的溶解性。此外, 还可使用鱼精蛋白、醋酸钠、有机溶剂沉淀等方法进行沉淀分离。外泌体功能取决于来源的细胞，可参与到机体的免疫应答、细胞迁移、细胞分化、中流侵袭等方面。江西腹膜透析液外泌体提取

不同来源的外泌体因其异质性在相同环境下保存, 其稳定性可能会大有不同。湖南体液外泌体透射电镜检测

由于特殊的结构和循环方式，外泌体作为药物运输的载体具有独特的优势。例如外泌体的尺寸分布能够增强渗透滞留效应，从而有选择性地深入中流组织;其外层磷脂双分子层可以保护内容物不受各种生物酶的影响，维持各种生物分子的活性;外泌体普遍存在于各种体液和组织中，其体积小，结构、组成与细胞膜类似，导致外泌体可以在避开免疫系统监督的同时深入组织内部，有较好的生物相容性;当采用内源外泌体时，能明显降低其他药物载体可能引起的有害免疫反应;除此之外，某些细胞来源或经特殊修饰过的外泌体具有良好的特异性，可以与特定的qi官或组织结合。湖南体液外泌体透射电镜检测

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