山东体液外泌体small RNA测序

研究者利用电穿孔法对外泌体进行DOX的负载，进行体内抗中流效果的研究。实验结果显示，负载DOX的iRGD肽靶向性外泌体对中流的抑制效果远优于单纯的DOX。直接静脉注射DOX，其不仅水溶性低，而且容易使DOX与血液中的蛋白结合，从而被网状内皮系统识别捕获，起不到理想的抗中流效果。而用iRGD肽靶向性的外泌体保护DOX，可以提高DOX水溶性，避免被网状内皮系统捕捉，提高靶向性，从而降低由于用药过量和非靶向性引起的毒性，起到更好的抗中流效果。人体内多种细胞在正常及病理状态下均可分泌外泌体，包括干细胞、免疫细胞、内皮细胞、及平滑肌细胞等。山东体液外泌体small RNA测序

外泌体能携带多种生物活性分子循环于血液／体液中并介导长距离的细胞间通讯，中流来源外泌体富含的蛋白质、核苷酸、脂质等分子能够反映其来源细胞的生理及病理状态，外泌体特殊的脂质双分子层结构能保护其内RNA等分子免于降解，因此，检测中流外泌体成为液体活检一个明显优势。临床试验研究表明，外泌体在多种疾病的早期诊断、疗效和预后监测等方面都具备较好的应用价值，正逐渐成为临床诊疗中新的、理想的生物标志物和可能的靶向药物载体。随着技术的进步，组学时代的到来，大规模蛋白质组学已经被联合应用于筛选和揭示多种ai症细胞外囊泡的标志物。唾液外泌体鉴定机体内几乎所有细胞均能分泌外泌体，而间充质干细胞分泌外泌体的能力很强。

外泌体是具有双层脂膜的囊泡结构, 其稳定性较好, 可保护内部生物分子免受体液中各种酶的影响, 从而保持其完整性和生物活性。外泌体被提取后一般悬浮于磷酸盐缓冲液。目前, 常用的储存方法为冷冻保存, 但是冷冻保存可能会导致外泌体形状与物理性质的改变, 也可能导致多层囊泡的形成和聚集, 反复冻融会导致外泌体表面分子的生物特性、含量和标志物组成发生变化。血清中包含外泌体在内的细胞外囊泡DNA在不同储存环境可保持稳定, 血浆存放于4 °C时其RNA会明显降解, 在–20 °C下长期保存也会导致血浆中外泌体总RNA降解, 但miRNA却十分稳定, 这也提示了外泌体miRNA作为生物标志物的潜力。

利用蛋白质免疫印迹和酶联免疫吸附分析技术可以对外泌体标志性蛋白质进行定性定量分析。其中蛋白免疫印迹是外泌体的经典表征手段之一，操作时往往需要细胞裂解液作为阴性对照。常用的外泌体标志性蛋白质包括四跨膜蛋白质CD63、CD81、CD9、中流易感基因101蛋白(TSG101)、水通道蛋白2(AQP2，尿液中)和凋亡诱导因子6相互作用蛋白(Alix)等，内参蛋白质可以是肌动蛋白(βActin)或甘油醛－3-磷酸脱氢酶，阴性对照蛋白可以是阻抑素(PHB，线粒体标志蛋白)或钙联结蛋白Calnexin。在酶联免疫吸附析法中，外泌体裂解液通过固载有抗体的固相基质，随后与检测抗体共孵育。两种方法均存在操作繁琐、耗时长的问题，相比较而言，酶联免疫吸附分析法比蛋白质免疫印迹法更加快速，适用于高通量分析。干细胞外泌体因在上皮组织的增殖、迁移、再生、炎症和瘢痕控制等方面的作用。

血清中的miR-122和miR-145非常不稳定, 将血清在4 °C短期保存期间即发生降解, 这可能是由外泌体的异质性所导致的。–80 °C保存被公认是保存各种生物标本如尿、牛奶、血液和支气管肺泡灌洗液适宜的保存环境, 虽然这样保存血浆可能产生含有大量“污染物”的外泌体。4 °C保存虽然容易导致外泌体中蛋白和核酸的损失, 但却能够避免冻融过程造成的囊泡破坏。外泌体虽然建议保存于-80 °C环境下, 但在处理或运输过程中有时很难维持这种低温条件。CHAROENVIRIYAKUL等提出一种冻干法以保存外泌体, 在冷冻过程中使用海藻糖作为保护剂, 海藻糖可以提供生物保护作用, 如稳定蛋白质、细胞膜和脂质体; 减少冷冻过程中冰的形成; 防止蛋白质以及外泌体的聚集; 减少分离和保存过程中细胞外囊泡的损失等。干细胞外泌体有减少细胞凋亡、促进血管生成、抑制纤维化等重要生物学功能，在调控组织再生方面有好的前景。江苏腹水外泌体western blot

外泌体是由细胞分泌而来的微小囊泡，直径约为30-200 nm，密度在1.13-1.21g/ml，具有杯状形态、双层膜结构。山东体液外泌体small RNA测序

卵巢ai患者与良性卵巢疾病患者血清外泌体中的miRNA表达谱有明显差异，表明血清外泌体中的miRNA可以作为卵巢ai活检的替代诊断标志物。多项研究表明外泌体中的miR-21在包括大多数ai症的多种病理条件下过度表达。尿液外泌体来源于泌尿系统相关的各种细胞，包括肾小球足细胞、肾小管细胞和膀胱等，因此尿液外泌体数目、形态和生化性质的改变往往反映泌尿系统疾病。通过对前列腺ai症患者尿液中的外泌体进行转录组分析，鉴定到两种已知的前列腺ai症标志物PCA-3(prostatecanceranti[1]gen3，前列腺ai抗原3)和TMPRSS2:ERG(thefusiongeneoftransmembraneproteaseserinestoERG，跨膜蛋白酶丝氨酸与ERG的融合基因)，表明尿液外泌体具有诊断和监测ai症患者状态的潜力。山东体液外泌体small RNA测序

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