福建外泌体质谱
液体活检是手术活检的微创替代方法,涵盖不同的分析物,包括细胞外囊泡(EV)、循环肿瘤细胞(CTC)、循环tumourDNA(ctDNA)、蛋白质和代谢物。几乎所有细胞都会释放外泌体,但恶性细胞释放率更高。它们是封装原始细胞的天然货物,因此可以提供了解tumour景观的窗口。外泌体通常被批量分析,这阻碍了从大型宿主EV背景分析罕见的肿瘤特异性EV亚群。在这里,我们在体外和体内分离了外泌体亚群,并表征了它们的表型和通用货物。我们使用5-氨基乙酰丙酸(5-ALA)来诱导内源性荧光肿瘤特异性外泌体(EVPpIX)的释放。对来自胶质母细胞瘤(GBM)细胞系的五个不同亚群(EVPpIX、EVCD63、EVCD9、EVEGFR、EVCFDA)的分析揭示了独特的转录组谱,其中EVPpIX转录组显示与其他亚群的致瘤过程更接近。同样,与来自血浆的大量EV相比,从GBM患者血浆中分离肿瘤特异性外泌体显示GBM相关基因富集。我们建议外泌体种群的分离有助于检测和分离肿瘤特异性EV以进行疾病监测。 干细胞外泌体可以再生皮肤和强化皮肤屏障,具有很好的再生效果,且没有其它副作用。福建外泌体质谱
信使 RNA 疗法的成功在很大程度上取决于能够安全、有效和稳定地将遗传物质转化为功能性蛋白质的递送系统的可用性。在这里,我们展示了通过人真皮成纤维细胞的细胞纳米穿孔产生的外泌体,以及包裹细胞外基质α1 I 型胶原蛋白 (COL1A1) 的 mRNA 编码诱导胶原蛋白移植物的形成并减少胶原蛋白中的皱纹形成。我们还表明,通过微针阵列皮内递送载有 mRNA 的 E外泌体 可导致动物真皮中胶原蛋白的合成和替换时间延长且更均匀。基于 外泌体的 COL1A1 mRNA 的皮内递送可能成为诊治光老化皮肤的有效蛋白质替代疗法。水果外泌体透射电镜检测外泌体的形成涉及到原生质膜的双重内陷和含有腔内小泡(ILVS)的细胞内多泡体(MVBS)的形成。
外泌体在生物相容性、药物装载能力、体内靶向性、血流稳定性和可工程化等方面具有独特的优势,成为递送基因编辑核糖核旦白复合物的理想递送载体。现有将Cas9RNP包载至外泌体中的方法主要依赖细胞内源性技术,需要事先在细胞中转染CRISPR-Cas9质粒,转录翻译后在特定时间收集该细胞的外泌体,步骤较多,复杂费时且可控性差。本研究采用优化的电穿孔方法避免了质粒转染的复杂过程,在细胞外直接将Cas9RNP装载至肝成纤维细胞来源的外泌体中,制备获得的外泌体基因编辑纳米颗粒(ExosomeRNP)可成功将RNP递送至靶细胞内产生高效的基因编辑效应。值得注意的是,在动物体内ExosomeRNP可通过肝脏蓄积和同源靶向作用,将RNP精细递送至肝脏组织中,避免非靶organ的基因编辑,提高体内基因组编辑的安全性和精细性。
外泌体是磷脂双层囊泡,可以由大多数的细胞产生,包括B细胞、T细胞、树突状细胞(DC)、巨噬细胞、神经元、胶质细胞、大多数肿瘤细胞系和干细胞等。外泌体的粒径在40到120纳米之间。作为胞外小泡的一种,当多泡体与质膜融合时,外泌体被分泌到细胞外。醉近,越来越多的证据表明,在生物体内遗传物质转移的自然途径中,外泌体可以在细胞之间传递丰富的物质。外泌体输送到受体细胞是介导细胞行为变化的关键步骤。此外,它们在细胞间通讯中也发挥着重要作用。由于这些特性,外泌体被用作药物和基因递送的载体。外泌体:细胞间的转运体醉早外泌体被认为是细胞的“垃圾袋”,让细胞摆脱一些无用蛋白,但近数年研究中发现,外泌体所携带的的“货物”具有重要的生物学意义。外泌体具有多种生物学功能,包括T细胞的抗原呈递和细胞因子转运。 依靠外泌体模拟物代替外泌体进行药物运输可以有效解决外泌体产量不足、提纯耗费时间的问题。
外泌体具有亲水性核新,这使得它们适合容纳可溶姓药物。由于外泌体是纳米级的并携带细胞表面分子,因此它们具有克服各种生物屏障的能力,并且具有天然的靶向能力。此外,与脂质体和基于病毒的药物递送系统相比,外泌体的免疫原性非常低。外泌体起着药物传递载体的作用越来越多的研究表明,药物外泌体是诊疗许多人类疾病的一种有前途的方法。目前,比较大的障碍是克服关于如何开发基于外泌体的药物制剂。泌体装载药物的方法——1)孵化将药物与外泌体结合的醉简单方法可能是共孵育。将PTX与MSC一起孵育产生了负载PTX的外泌体,这些外泌体表现出显着的抗肿瘤作用。2)电穿孔电穿孔涉及使用短的高压脉冲穿透外泌体膜。在1000kV电压下电穿孔药物和外泌体的混合物5毫秒,成功地将药物装载到外泌体中。3)超声处理药物-外泌体混合物通过超声处理可以有效地将药物装载到外泌体中(图3)。考虑到大小、Zeta电位和载药量,超声处理后外泌体膜的结构和含量没有明显变化。此外,药物外泌体制剂在各种条件下保持了一个多月的稳定性。与其他纳米颗粒相比,载药的外泌体被大量吸收。它们还可以克服P-糖蛋白(P-gp)介导的药物外流,从而提高耐药tumour的诊疗效果。 外泌体特主要来源于细胞内多囊泡体,经多囊泡体外膜与细胞膜融合后释放到胞外基质中。水果外泌体粒径检测
外泌体结构的多功能性,使得其可以用各种方法修改,从而扩展生物医学应用。福建外泌体质谱
如外泌体加载的miRNA通讯通路的存在所证明的那样,对于其他RNA类型,miRNA似乎优先加载到外泌体中,表明细胞内存在内源加载系统。AGO2是一种RNA结合蛋白,可结合miRNA,可能负责外泌体中的miRNA加载。由于它们在外泌体中具有深远的调节潜力和天然存在性,miRNA和AGO2结合小发夹RNA(shRNA)似乎是外泌体诊疗的理想候选者。在外泌体中观察到的另一类调节RNA是环状RNA(circRNA)。CircRNA是一类单链环状非编码RNA,已观察到一些基因表达的circRNA数量是蛋白质编码mRNA的数倍,表明其具有重要的功能作用,包括通过吸收miRNA进行转录调节、与蛋白质相互作用、与pre-mRNA剪接竞争,以及很少作为模板用于蛋白质翻译。缺少5'和3'末端可保护circRNA免于被核酸外切酶降解,这醉终使这些转录本在细胞质中的寿命比其他RNA更长。醉近,发现功能性circRNA被外泌体加载并转移到受体细胞中。外泌体中的circRNA和线性RNA之间的比率高于生产细胞,表明内源性分选机制。由于它们增加的稳定性,circRNA可以被包装到外泌体中并转移到靶细胞,在那里它们可以比典型的mRNA更长时间地支持蛋白质翻译。值得注意的是,circRNA可以设计为具有内部核糖体进入位点(IRES)以表达感兴趣的蛋白质。福建外泌体质谱
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