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时间:2023年06月27日 来源:

膜片钳的应用:对药物作用机制的研究:在通道电流记录中,可分别于不同时间、不同部位(膜内或膜外)施加各种浓度的药物,研究它们对通道功能的可能影响,了解那些选择性作用于通道的药物影响人和动物生理功能的分子机理。这是膜片钳技术应用较普遍的领域,既有对西药药物机制的探讨,也普遍用在重要药理的研究上。如开丽等报道细胞贴附式膜片钳单通道记录法观测到人参二醇组皂苷可抑制正常和“缺血”诱导的大鼠大脑皮层神经元L-型钙通道的开放,从而减少钙内流,对缺血细胞可能有保护作用。陈龙等报道采用细胞贴附式单通道记录法发现乌头碱对培养的Wistar大鼠心室肌细胞L-型钙通道有阻滞作用。膜片钳的数据如何处理:通过渗透很快改变胞浆成分并达到平衡。宁波医学实用膜片钳网站

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膜片钳电生理技术服务的数据如何处理:1.内面向外式膜片细胞内外和电极内的溶液均可调控,既能较容易地改变细胞内的离子或物质浓度,又能把酶等直接加于膜的内侧面,适宜研究胞内物质对通道活动的影响。但实验中难以改变膜外侧物质,且需浸于低钙液中。常用于研究依赖细胞内钙的离子通道,如钙敏感的钾通道,还可用于细胞内和第二信使与通道的调节作用。2.外面向外式膜片能接触膜的两侧,可以任意改变膜外物质的浓度,有利于研究离子、递质对膜外表面的作用,多用于研究细胞膜外侧受体控制的离子通道。这些受体直接作用于离子通道,而不需经过第二信使系统。因细胞外液容易更换,故加药方便。缺陷是实验中难以改变胞内成分,而且电极管内必须充以低钙液。膜片钳的数据如何处理:细胞钳记录的是许多通道的平均电流,有利于综合分析。徐州细胞生物学实用膜片钳服务使用膜片钳全细胞记录技术观察拮抗剂对烟碱受体激动剂量效曲线的影响,来确定其作用的动力学特征。

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膜片钳在通道研究中的重要作用:用膜片钳技术可以直接观察和分辨单离子通道电流及其开闭时程、区分离子通道的离子选择性、同时可发现新的离子通道及亚型,并能在记录单细胞电流和全细胞电流的基础上进一步计算出细胞膜上的通道数和开放概率,还可以用以研究某些胞内或胞外物质对离子通道开闭及通道电流的影响等。同时用于研究细胞信号的跨膜转导和细胞分泌机制。结合分子克隆和定点突变技术,膜片钳技术可用于离子通道分子结构与生物学功能关系的研究。

膜片钳在通道研究中的重要作用:对离子通道生理与病理情况下作用机制的研究:通过对各种生理或病理情况下细胞膜某种离子通道特性的研究,了解该离子的生理意义及其在疾病过程中的作用机制。如对钙离子在脑缺血神经细胞损害中作用机制的研究表明,缺血性脑损害过程中,Ca2+ 介导现象起非常重要的作用,缺血缺氧使Ca2+通道开放,过多的Ca2+进入细胞内就出现Ca2+超载,导致神经元及细胞膜损害,膜转运功能障碍,严重的可使神经元坏死。膜片钳技术的应用范围:在心血管药理方面的研究。

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膜片钳技术之全细胞记录的实验流程:(1)破膜:加大微电极内的负压将细胞膜吸破,此时可见时间常数较大的全细胞膜电容电流的出现,以及方波电流的轻微加大。①可用嘴吸;②也可用注射器施加负压;③还可以在施加负压的基础上进行电击穿来破膜。若只用电击穿破膜,形成的入口电阻Ra较大。(2)细胞破膜后,若所用浴液的渗透压比电极内液的渗透压略高,则应该将所施加的负压力在几秒内或几十秒内去掉;反之,适当保留一点负压对破膜状态及细胞的稳定更有利。(3)全细胞膜电容补偿:调节全细胞膜电容补偿板块中的Cm和Rs进行膜电容电流补偿,使输出电流信号中细胞膜电容电流成分消失或变至较小。(4)串联电阻补偿:打开串联电阻补偿键,调节串联电阻补偿至不产生震荡为度。(5)漏减调节。(6)正式进入标本细胞的检测。膜片钳技术可用于研究特殊制备的巨型球状体中的细菌离子通道。徐州细胞生物学实用膜片钳服务

膜片钳技术的应用范围:对单细胞形态与功能关系的研究。宁波医学实用膜片钳网站

膜片钳在通道研究中的重要作用:利用膜片钳技术还可以用于药物在其靶受体上作用位点的分析。如神经元烟碱受体为配体门控性离子通道,膜片钳全细胞记录技术通过记录烟碱诱发电流,可直观地反映出神经元烟碱受体活动的全过程,包括受体与其激动剂和拮抗剂的亲和力,离子通道开放、关闭的动力学特征及受体的失敏等活动。使用膜片钳全细胞记录技术观察拮抗剂对烟碱受体激动剂量效曲线的影响,来确定其作用的动力学特征。然后根据分析拮抗剂对受体失敏的影响,拮抗剂的作用是否有电压依赖性、使用依赖性等特点,可从功能上区分拮抗剂在烟碱受体上的不同作用位点,即判断拮抗剂是作用在受体的激动剂识别位点,离子通道抑或是其它的变构位点上。宁波医学实用膜片钳网站

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