芜湖医学脑定位膜片钳原理及步骤

膜片钳技术在通道研究中的重要作用：1.与药物作用有关的心肌离子通道：心肌细胞通过各种离子通道对膜电位和动作电位稳态的维持而保持正常的功能。近年来，国外学者在人类心肌细胞离子通道特性的研究中取得了许多进展，使得心肌药理学实验由动物细胞模型向人心肌细胞成为可能。2.对离子通道生理与病理情况下作用机制的研究：通过对各种生理或病理情况下细胞膜某种离子通道特性的研究，了解该离子的生理意义及其在疾病过程中的作用机制。膜片钳技术本质上也属于电压钳范畴。芜湖医学脑定位膜片钳原理及步骤

膜片钳的数据如何处理：穿孔膜片(perforated patch)是为克服常规全细胞模式的胞质渗漏问题,有学者将与离子亲和的制霉菌素或二性霉素b经微电极灌流到含有类甾醇的细胞膜上,形成只允许一价离子通过的孔,用此法在膜片上做很多导电性孔道,借此对全细胞膜电流进行记录。由于此模式的胞质渗漏极为缓慢,局部串联阻抗较常规全细胞模式高,所以钳制速度很慢,也称为缓慢全细胞模式。它适合于小细胞的电压钳位,对于直径大于30μm的细胞很难实现钳位。不足之处是由于电极与细胞间交换快,细胞内环境很容易破坏,因此记录所用的电极液应与胞浆主要成分相同,如高k+,低na+和ca2+及一定的缓冲成分和能量代谢所需的物质。金华细胞生物学膜片钳设计公司膜片钳技术的应用范围：在心血管药理方面的研究。

膜片钳实验的细胞膜型：一个完整的细胞膜电学模型包含几个基本组分：膜电容，膜电阻和膜电势。这三个电学组分形成的原因各不相同：1、膜电容（membranecapacitance,Cm）的形成是由于生物膜为磷脂双分子层，对离子和其他水溶性物质均不通透，遂使细胞膜成为了电的不良导体，进而导致细胞外液-磷脂双分子层-细胞内液构成了细胞膜电容。Cm的大小与细胞膜表面积成正比，与磷脂双分层的厚度成反比。膜电容在这里的作用，主要为完成细胞的充放电过程。2、膜电阻（membraneresistance,Rm）的形成是由于细胞膜上的蛋白质通道，也就是离子通道的存在。离子和小的极性分子只有通过通道才能进出细胞膜，因此膜电阻在这里的作用，主要就是控制离子的进出。3、膜电势（membranepotential,Vm）又称膜电位，源自膜内外离子浓度的差异，离子浓度的差异又源于细胞膜对离子的选择透过性。膜电位一般可分为静息电位、动作电位和等级电位（不懂的自己去查，此处不赘述）。膜电位的作用主要是维持神经元的兴奋性，并改变离子通道的状态。

膜片钳电生理纪录系统及记录方法：细胞膜由双层脂膜组成，具有密封绝缘的特性，因此当纪录 电极接触到细胞膜时电阻会开始上升，然后以人工方式对纪录电极内施加一个负压，可以让电极与胞膜之间吸附得更为紧密而电阻也会加速上升，当纪录电极的电阻达到千兆欧姆(Giga Ω)时，意味着细胞膜与电极之间几乎没有电流漏出，之后对电极内压力施以一个快速的负压将细胞膜吸破，这样纪录电极与细胞胞体之间会形成一个封闭的电容，此时就可以开始对细胞进行实验。全自动膜片钳系统技术指标：操作简单，全过程可自动化。

膜片钳技术基本原理与特点：高阻封接技术还很大降低了电流记录的背景噪声，从而戏剧性地提高了时间、空间及电流分辨率，如时间分辨率可达10 μs、空间分辨率可达1平方微米及电流分辨率可达10-12 A。影响电流记录分辨率的背景噪声除了来自于膜片钳放大器本身外，比较主要还是信号源的热噪声。一般只有一个或几个通道，经这一个或几个通道流出的离子数量相对于整个细胞来讲很少，可以忽略，也就是说电极下的离子电流对整个细胞的静息电位的影响可以忽略，那么，只要保持电极内电位不变，则电极下的一小片细胞膜两侧的电位差就不变，从而实现电位固定。膜片钳使用操作注意：不得在本机电脑下载别的软件，拷数据时需用实验室配置的U盘。金华细胞生物学膜片钳设计公司

全自动膜片钳系统技术指标：进行细胞吸附、封接和维持全细胞记录模式。并兼容常规膜片钳放大。芜湖医学脑定位膜片钳原理及步骤

膜片钳的应用：在心血管药理研究中的应用：随着膜片钳技术在心血管方面的普遍应用，对血管疾病和药物作用的认识不只得到了不断更新，而且在其病因学与药理学方面还形成了许多新的观点。正如诺贝尔基金会在颁奖时所说：“Neher和Sadmann的贡献有利于了解不同疾病机理，为研制新的更为有效的药物开辟了道路”。创新药物研究与高通量筛选：在离子通道高通量筛选中主要是进行样品量大、筛选速度占优势、信息量要求不太高的初级筛选。较近几年，分别形成了以膜片钳和荧光探针为基础的两大主流技术市场。将电生理研究信息量大、灵敏度高等特点与自动化、微量化技术相结合，产生了自动化膜片钳等一些新技术。芜湖医学脑定位膜片钳原理及步骤

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