黑龙江FabRICATOR ZIdeS蛋白酶IgG特异性蛋白酶

Genovis的FabDELLO在铰链上方的单个位点消化人IgG1，并在两小时内生成均质的Fab和Fc片段（Genovis的IdeS在铰链区下方的单个位点进行消化）。生成的片段可用于结晶和高阶结构（HOS）的NMR研究、结合研究等。突变的铰链区域是zhiliao性候选抗体的常见修饰，以降低效应器功能。这些突变可能会影响具有高底物特异性的酶的抗体消化效率。例如，高度特异性的FabRICATOR（IdeS）消化效率对含有常见LALA突变的抗体产生负面影响。FabDELLO作用于人IgG1铰链上方的单个暴露赖氨酸残基，能够对具有突变铰链区域的抗体进行流行的中级LC-MS分析。例如，用FabDELLO消化市售的IgG1risankizumab，在下铰链区域具有LALA突变，并通过反相LC-MS进行分析。消化产生均匀的Fab和Fc片段。用20mMDTT还原片段，用于中级LC-MS分析，发现产生了均相的Fc/2、轻链（LC）和Fd片段。用FabDELLO消化后观察到的定义峰显示出均匀的片段生成和酶的稳健性能。Blinatumomab（一种对 CD19 和 T 细胞标志物 CD3 具有特异性的 BiTE 分子）。黑龙江FabRICATOR ZIdeS蛋白酶IgG特异性蛋白酶

与IdeS不同，为了获得更均匀的度拉糖肽融合蛋白的消化产物，用Genovis的GlySERIAS固定化蛋白质消化该蛋白质，该蛋白由与琼脂糖珠共价偶联的GlySERIAS酶组成。通过将酶偶联到树脂上，可以增加酶与蛋白质的比率，从而可以进一步加速反应，以获得更完整的连接子消化。此外，该酶不会存在于样品制备中，可能会干扰样品分析。为了进行比较，度拉糖肽在37°C下用GlySERIAS固定化过夜，或用GlySERIAS冻干1小时并在37°C下过夜消化。 为了降低样品复杂性，使用内切糖苷酶GlycINATOR冻干去除Fc聚糖，并减少链间二硫键。通过反相LC-MS对样品的分析表明，GlySERIAS Immobilized几乎完全消化了Fc结构域中的连接子，留下了接近均质的Fc/2产物，其中含有来自连接子的一个丝氨酸残基。用 GlySERIAS 冻干 1 小时或过夜消化，两者都会产生几种 Fc 产物，并附着不同数量的丝氨酸和甘氨酸残基。GLP-1肽在所有三个样品中以两种变体存在。使用GlySERIAS固定化消化的均质Fc/2能够详细研究特定于Fc区域的质量属性。此外，在样品中未观察到干扰分析的酶峰。作为补充，Fc/2 产物在用 GlySERIAS 冻干消化后残留部分连接子，有助于研究位于 GS 连接子的修饰。天津GlycINATORIdeS蛋白酶蛋白组学Genovis的GingisREX （RgpB） 是一种精氨酸特异性蛋白酶。

与IdeS不同，Genovis的GingisKHAN（Kgp）是一种半胱氨酸蛋白酶，可在铰链上方的单个位点（KSCDK/THTCPPC）消化人IgG1，产生完整且均质的Fab和Fc片段。GingisKHAN是一种赖氨酸特异性蛋白酶。单一的消化位点是人IgG1三维结构的结果，使这种赖氨酸暴露于酶中。如果去除N-聚糖，则Fc上暴露的赖氨酸处可能会出现额外的消化位点。GingisKHAN需要温和的还原条件才能具有活性，并且在37°C和pH8下获得活性。还原剂（2mM半胱氨酸）与酶一起提供。GingisKHAN是从牙龈卟啉单胞菌中纯化的。该酶用于使用LC-MS表征基于抗体的生物zhiliao药物，研究Fc聚糖分析、双特异性抗体、亲和力和亲和力效应，并鉴定翻译后修饰。

大多数zhiliao性抗体都携带人IgG1骨架，双特异性和多特异性形式的开发正在迅速增加。此类抗体的分析需要特异性酶来表征特性，例如单价结合、二硫键扰乱和配对Fc糖基化。传统方案包括使用木瓜蛋白酶和Lys-C的酶消化，这需要优化以极大限度地减少过度消化并获得足够的产量。Genovis的FabDELLO与IdeS酶具有不同的特异性，它在铰链上方的单个位点消化人IgG1，并产生完整的Fab和Fc片段。为了证明FabDELLO的特异性活性，通过非还原SDS-PAGE消化和分析了IgG1和Fc融合蛋白的选择。所有底物均实现了完全消化，包括具有其他困难的LALA和LFLE突变的IgG1。FabDELLO酶在底物上的精确和有效性能验证了其在生物制药开发中的用途。Genovis发现大部分缓冲液与FabRICATOR活性兼容，已经测试了PBS和150mM 醋酸铵 pH7，也适用于FabRICATOR HPLC。

Genovis酶的适应性和更高的通量和自动化工作流程的中级方法，这是非常重要的。 随着分析方法和仪器的改进，在表征实验室中有更大的能力进行更多类型的分析，或者在工艺开发或QC实验室中有更先进的分析仪器。 当涉及到能够支持大量样本分析的活动时，例如克隆筛选，工艺开发和验证以及稳定性研究，这是非常好的。 此外，Genovis产品的效率、健壮性（Robust）和易用性使它们更容易应用于这些类型的工作，而且，也适用于受控环境中的批次放行方法。Genovis的产品很好地支持这种类型的工作，这也促使Genovis不断推出新产品和现有产品的不同形式，以支持客户的工作。工艺开发和潜在生物制药稳定性研究相关的大量样品。福建GingisKHANIdeS蛋白酶蛋白组学

Genovis的FabDELLO可在铰链上方的单个位点消化人 IgG1，在两小时内产生完整的 Fab 和 Fc 片段。黑龙江FabRICATOR ZIdeS蛋白酶IgG特异性蛋白酶

抗体由于其大小和复杂性，是一种难以表征的分子。偶联药物有效载荷是对抗Ai症等疾病的一种有吸引力的方法，但进一步增加了异质性的复杂性和风险。抗体药物偶联物 （ADC） 需要像任何其他基于 IgG 的生物制药一样进行仔细和详细的表征，并且需要适当的分析工作流程。Genovis的FabRICATOR（IdeS）酶将ADC消化成其亚基，可以详细表征这类复杂的药物。Genovis的内切糖苷酶 IgGZERO和 GlycINATOR 还可以研究完整的 ADC，但降低复杂性并提高分辨率。黑龙江FabRICATOR ZIdeS蛋白酶IgG特异性蛋白酶