HE染色分析

HE染色组织样本水化：将浸泡过二甲苯的待测组织样本先放入无水乙醇中浸泡5min，使脱蜡时用的二甲苯可以被洗脱出去，使水可以进入组织中；再依次置于95%、85%、70%乙醇中各浸泡５min以达到充分水化的效果。组织切片苏木素染色、分化与反蓝：将水化后的组织样本的切片使用PBS溶液浸泡清洗，每次浸泡５min，总共清洗３次。之后用移液***吸取已经预先配制好的苏木素染色液，每个组织切片滴加100ul，充分染色10min。染色完毕后使用蒸馏水洗去多余的苏木素染色液。然后再使用1%的盐酸乙醇进行分化，使细胞核中结合过多的染液和细胞浆中的多余的染液被除去。分化完成后，再用双蒸水将组织切片冲洗干净。为了使苏木素染蓝色，使用弱碱性的促蓝液加入组织切片中，让细胞核染蓝色。反蓝结束后先用清水进行清洗，再用双蒸水将组织切片冲洗干净。冰冻组织切片的HE染色。HE染色分析

HE染色原理：一、细胞核染色原理：苏木精为碱性天然染料，可使细胞核着色。细胞核内染色质的成分主要是DNA，在DNA的双螺旋结构中，两条核苷酸链上的磷酸基向外。使DNA双螺旋的外侧带负电荷，呈酸性，很容易与带正电荷的苏木精碱性燃料以离子键或氢键结合而被染色。苏木精在碱性溶液中呈蓝色，所以细胞核被染成蓝色。二、细胞浆染色原理：细胞浆内主要成分是蛋白质，为两性化合物、细胞浆的染色与pH值有密切关系，当pH调到蛋白质等电点4.7-5.0时，胞浆对外不显电性，此时酸或碱性染料不易染色。当pH调到6.7-6.8时，大于蛋白质的等电点pH值，表现酸性电离，而带负电荷的阴离子，可被带正电荷的染料染色，现时胞核也被染色，核和胞浆难以区分。因此必须把pH调至胞浆等电点以下，在染液中加入醋酸使胞浆带正电荷（阳离子），就可被带负电荷（阴离子）的染料染色。伊红Y是一种化学合成的酸性染料，在水中离解成带负电荷的阴离子，与蛋白质的氨基正电荷（阳离子）结合而使细胞浆染色，细胞浆、红细胞、肌肉、结缔组织，嗜伊红颗料等被***成不同程度的红色或粉红色，与蓝色的细胞核形成鲜明的对比江苏靠谱的HE染色哪家好常用HE染色试剂配制方法。

HE染色细胞质过染分析及应对原因：（1）伊红染色液浓度太高，特别是焰红燃料、四溴四氯荧光素钠的存在；（2）切片在伊红染色时间过长；（3）切片在伊红染色后经乙醇脱水步骤时过的太快，而使乙醇分化伊红的作用不能产生。对策：适当稀释伊红染色液，减少伊红染色时间，或者使切片在乙醇脱水等步骤时，停留时间相对均匀。同样，也要检查切片的厚度是否合适。切片中出现蓝黑色沉淀物分析及应对原因：苏木精染色液中的金属膜，黏附在玻片上。对策：每天染色前仔细过滤苏木精染色液，或建议使用半氧化苏木精染色液，如Gill苏木精染色液,可以避免过多的金属膜产生。

HE染色分化作用：染色后，用某些特定的溶液将组织过多结合的染色剂脱去，这个过程称为分化作用，所用的溶液称为分化液。在HE染色中用0.5%盐酸乙醇作为分化液，因酸能破坏苏木精的醌型结构，使组织与色素分离而褪色。经苏木精染色后，必须用0.5%盐酸乙醇分化，使细胞核过多结合的苏木精染料和细胞浆吸附的苏木精染料脱去，在进行伊红染色，才能保证细胞核与细胞浆染色的分明。因此，在HE染色中分化是极为关键的一步。返蓝作用：分化之后，苏木精在酸性条件下处于红色离子状态，呈红色，在碱性条件下处于蓝色离子状态，呈蓝色。组织切片经0.5%盐酸乙醇分化后呈红色或粉红色，故分化之后，立即用水出去组织切片上的酸而终止分化，再用弱碱性水（0.2%氨水）使苏木精染上的细胞核呈现蓝色，这个过程称为返蓝作用或蓝化作用。另外用自来水浸洗也可使细胞核返蓝，但所需时间较长。HE染色的实验目的以及实验结果分析。

HE染色不管怎么操作，始终无法染色或淡染答：这种情况一般因为组织固定时采用了酸性甲醛;或者组织在甲醛中浸泡时间太长;或者久置的甲醛变性分解为甲酸。补救：防患于未然，要么使用新鲜的中性甲醛固定，要么在存放的甲醛中加一点碳酸钠中和甲酸。对于已经固定的组织可考虑再次固定；对于已经制出的片子，染色前采用5%重铬酸钾溶液浸泡半小时以上，然后自来水漂洗5min，可改善染色。也可以将切片放入3%硫酸铁铵溶液中，补充染色媒介，增强苏木素与组织的亲和力(苏木素染色必须要媒介才能染上，单纯的苏木素与组织的亲和力很弱)。冰冻切片是否可以做HE染色？江苏靠谱的HE染色哪家好

HE染色取材和样本保存方式。HE染色分析

HE染色常见问题：成片的染色模糊不清，灰染答：（1）组织未及时固定，部分自溶；或固定不佳，深部组织未处理到。这种只能重新固定了。（2）尽管乙醇也是一种固定液，但尽量少用或不用，因为其会导致组织发硬变脆，染色效果不好。（3）包埋时蜡的温度过高，或切片后烤片时间和温度过久过高都不好，可能会导致无法染色。（4）脱蜡不彻底；染料有问题；分化过度导致的颜色变淡，镜下组织界限不清；染完后的脱水和透明不佳，水雾残留在组织上。（5）通风窗中（防止空气中的水雾），戴口罩操作封片（减少哈气带来的水雾）。HE染色分析