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细胞爬片的免疫荧光步骤基本一致：1. 取出细胞爬片放到35mm或60mm用过的细胞培养皿里，PBS洗三遍。注意：有的时候作的细胞爬片可能比较小，因此夹取的时候要小心，注意 反正面，放在皿里洗比较方便，避免了来回夹取，另外洗的时候加PBS不要太冲，不要细胞冲下来。洗的时候我都是多加PBS，稍晃一下就倒掉，没有等5分钟或10分钟。2. 4%冷的多聚甲醛固定20分钟，PBS洗三遍。3. 0.2%Triton X-100通透10分钟，PBS洗三遍。4. 与二抗相同宿主的血清封闭30分钟，PBS洗三遍。5. 一抗4度湿盒内过夜，也可37度2小时，感觉前者效果好，PBS洗三遍。6. 二抗室温2小时(避光)，或者37度1半小时，PBS洗三遍。7. 较好用DAPI染核，然后直接照荧光片。8. 蒸馏水洗掉PBS，甘油封片，指甲油封片子的四周，因为甘油不象树脂那样会干，所以不用指甲油封的话会弄的一塌糊涂。免疫荧光在医学诊断中起着重要作用，可以用于检测病原体、肉瘤标志物等。klf8免疫检测

荧光色素：异硫氰酸荧光素（fluoresceinisothiocyanate，FITC）为黄色或橙黄色结晶粉末，易溶于水或酒精等溶剂。分子量为389.4，较大吸收光波长为490495nm，较大发射光波长520530nm，呈现明亮的黄绿色荧光，结构式如下：有两种同分异结构，其中异构体Ⅰ型在效率、稳定性、与蛋白质结合能力等方面都更好，在冷暗干燥处可保存多年，是应用较普遍的荧光素。其主要优点是：①人眼对黄绿色较为敏感，②通常切片标本中的绿色荧光少于红色。四乙基罗丹明（rhodamine，RIB200）为橘红色粉末，不溶于水，易溶于酒精。性质稳定，可长期保存。结构式如下：较大吸收光波长为570nm，较大发射光波长为595～600nm，呈橘红色荧光。CD20免疫荧光免疫荧光技术可以用于研究细胞凋亡和细胞存活。

荧光抗体技术：抗原抗体反应后，利用荧光显微镜判定结果的检测方法。免疫荧光测定：抗原抗体反应后，利用特殊仪器测定荧光强度而推算被测物浓度的检测方法。免疫荧光实验步骤：直接法测抗原：基本原理：将荧光素标记在相应的抗体上，直接与相应抗原反应。其优点是方法简便、特异性高，非特异性荧光染色少。缺点是敏感性偏低；而且每检查一种抗原就需要制备一种荧光抗体。此法常用于细菌、病毒等微生物的快速检查和肾炎活检、皮肤活检的免疫病理检查。

细胞免疫荧光可以观察蛋白在细胞中的定位，以及一些特殊信号分子蛋白的出核/入核的定位变化。在进行细胞免疫荧光过程中，需要用到细胞爬片，通过将爬片浸在细胞培养基内，细胞在爬片上生长，进而进行细胞的免疫荧光。实验前准备：1.胰酶;2.DMEM细胞培养基;3.细胞培养12孔板或者6孔板;4.爬片。间接免疫荧光的优点：通过增加能够与一抗结合的二抗数量进行信号放大；与直接免疫荧光相比，通过信号放大提高检测灵敏度。免疫荧光技术是一种以荧光素标记抗体来定位抗原物质的高度发达的标记免疫技术。免疫荧光技术在免疫学研究中发挥重要作用，帮助揭示细胞和分子的功能和相互关系。

免疫荧光注意事项：对照实验的设置：1、内源性组织背景对照：某些细胞和组织可能有固有的生物学性质，会产生背景荧光，对结果产生影响，例如色素脂褐质。因此在孵育一抗前，应对样品进行观察，确保抗原本身没有信号。2、阳性对照：用确认含有待测抗原的组织或细胞，与待测标本进行统一处理，结果应为阳性，可证明待测抗原有一定活性并且实验过程中用的试剂及方法均可靠。3、阴性对照：与阳性对照相反，用明确不含有待测抗原的细胞或组织切片染色，结果若为阴性，可排除染色过程中由于非特异性染色造成的假阳性结果。免疫荧光技术可以用于研究细胞信号传导和信号通路。AIRE-1免疫荧光试验

免疫荧光技术是一种利用荧光物质标记抗体来定位抗原的技术。klf8免疫检测

细胞免疫荧光步骤对大家来说一定是很陌生的，他是一种抗原抗体反应，好像对我们来说他显得很遥远的样子，因为我们并不了解他能做什么，通过这种技术可以让我们对抗原或抗体的性质、定位一次来分析出更多的数据。细胞免疫荧光，这对很多人来说都是一次听说这个东西，也不知道他对我们会有什么好处与坏处，科学研究就是这样子的，普通老百姓是不会明白其中的道理的，但是这些研究也是确实的在我们的生活中取得了成果，能够让大家过的更加舒适。klf8免疫检测