浙江有酚红缓冲液答疑解惑

一、为什么缓冲溶液可以维持PH值的稳定呢？其实这主要是因为缓冲溶液自身的成分和性能，它的成分里包含了酸、盐或碱，所以在一定程度上可以抵消外界加入酸性或碱性溶液带来的影响。二、配制缓冲溶液作用有哪些？1、缓冲溶液是分析检测实验中常会用到的溶液，实验中通常会要求溶液的pH值需要保持在一个规定的范围内，以保证指示剂的显色或变色，这些通过加入一定量的缓冲溶液就能达到目的。2、缓冲溶液在医学检验中也起着很重要的作用，主要是因为缓冲溶液可以保持机体正常血液PH范围，其中碳酸-碳酸氢钠是血液中主要的缓冲对，这与肺呼吸以及肾功能排泄息息相关。而机体正常新陈代谢后产生的CO2，会进入血液与水结合成碳酸,碳酸又与血浆中的碳酸氢根离子组成共轭酸碱对，所以缓冲溶液在医学上就有不可忽视的作用。由弱酸及其盐组合一起使具有缓冲作用。浙江有酚红缓冲液答疑解惑

    从中选取包被抗体浓度和酶标抗体的稀释度。为了进一步节省试剂，可以此浓度为基点，缩小间距再进一步做棋盘滴定。?2测定方法的标准化?2．1加样?????ELISA中除了包被外，一般需进行96孔加样。定性测定中有时不强调加样量的准确性。例如规定为加样1滴，如不具备相当的条件，要尽量使用相同口径的滴管，保持准确的加样姿势，使每滴液体的体积基本相同。在定量测定中，加样量应力求准确，**好采用量程准确的微量移液器。加样时应将液体加在孔底，不要加在孔壁上部，避免出现气泡。?2．2保温?????在ELISA中，一般在加标本和结合物后，反应的温度和时间应按规定的要求，保温容器**好是水浴箱，可使温度迅速平衡。各ELISA板不应叠在一起。为避免蒸发，板上应加盖，或将板平放在底部垫有湿纱布的湿盒中。如用保温箱，空湿盒应预先放在其，以平衡温度。?2．3洗涤?????洗涤在ELISA过程中不是反应步骤，但却是决定实验成败的关键。在标本和结合物的稀释液和洗涤液中加入聚山梨酯一类物质即避免非特异性吸附，在ELISA中**为常用。ELISA板的洗涤一般可采用以下方法：吸干孑L内反应液；将洗涤液注满板孔；发表评论请自觉遵守互联网相关的政策法规，严禁发布***、**、反动的言论。中国香港HBSS缓冲液联系方式PBS缓冲液是一种常用的缓冲剂,用于调节pH值和保持溶液的稳定性。

PBS缓冲液的性质和优点4.无毒性：PBS缓冲液是一种非常安全的缓冲液，对生物样品和细胞没有毒性。5.维持稳定性：PBS缓冲液能够维持生物样品的稳定性，防止样品的变性和降解。6.pH稳定：PBS缓冲液的pH值一般在7.2-7.4之间，非常适合细胞和生物样品的生长和保存。7.离子平衡：PBS缓冲液中的适当离子浓度可以提供细胞所需的离子环境，维持细胞的正常生理功能。8.易于制备：PBS缓冲液的制备非常简单，只需要将磷酸盐和盐溶解在适量的水中即可。

    该酶标IsC的工作浓度应为1／1?600。?????棋盘滴定法选择包被抗原工作浓度：①用包被液将抗原由1：50开始作比倍稀释后进行包被，洗涤。②将强阳性参考血清、弱阳性参考血清和阴性参考血清用稀释液作1：100稀释，加样，保温、洗涤。③加按工作浓度稀释的酶标IsC抗体，保温、洗涤。④加底物显色。加酸终止反应后读取A值。⑤选择强阳性参考血清的A值为0．8左右、阴性参考血清的A值小于0．1的包被抗的稀释度作为工作浓度，从中选取**适工作浓度。?1．2夹心法测抗原?????在夹心ELISA法中，可用棋盘滴定法同时选择包被抗体和酶标抗体的工作浓度。①抗体免*球蛋白用包被缓冲液稀释至蛋白浓度为10．0、1．0和0．1微克／毫升，分别在ELISA板上进行包被，每一浓度包括3个纵行，洗涤。②在1个横行各包被孔中加入强阳性抗原液，另1横行加入弱阳性抗原液，第3横行加入阴性对照液，保温、洗涤。③将酶标抗体用稀释液稀释成3个浓度，例如1：1?000、1：5?000和1：25000。分别加入每个包被浓度的1个纵行中，保温、洗涤。④加底物显色。加酸终止反应后，读取A值。⑤以强阳性抗原的A值在0．8左右、阴性参考的A值小于0．1的条件作**适条件，据此选择包被抗体和酶抗体的工作浓度。缓冲液浓度和温度的影响。

    Buffer组份浓度：137mMNaCl,mMKCl,10mMNa2HPO4,2mMKH2PO4配制量：1L配制方法：1.称量下列试剂，置于1L烧杯中。2.向烧杯中加入约800ml的去离子水，充分搅拌溶解。3.滴加浓盐酸将pH值调节至，然后加入去离子水将溶液定容至1L。4.高温高压**后，室温保存。注意：上述Buffer中无二价阳离子，如需要，可在配方中补充1mMCaCl2和mMMgCl2。10M醋酸铵组份浓度：10M醋酸铵配制量：100ml配制方法：1.称量g醋酸铵置于100～200ml烧杯中，加入约30ml的去离子水搅拌溶解。2.加去离子水将溶液定容至100ml。3.使用mm滤膜过滤**。4.密封瓶口于室温保存。注意：醋酸铵受热易分解，所以不能高温高压**。Tris-HCl平衡苯酚配制方法：1.使用原料：大多数市售液化苯酚是清亮无色的，无需重蒸馏便可用于分子生物学实验。但有些液化苯酚呈粉红色或黄色，应避免使用。同时也应避免使用结晶苯酚，结晶苯酚必须在160℃对其进行重蒸馏除去诸如醌等氧化产物，这些氧化产物可引起磷酸二酯键的断裂或导致RNA和DNA的交联等。因此，苯酚的质量对DNA、RNA的提取极为重要，我们推荐使用高质量的苯酚进行分子生物学实验。2.操作注意：苯酚腐蚀性极强，并可引起严重灼伤，操作时应戴手套及防护镜等。PBS缓冲液的pH值为7.2-7.4，与人体血液等渗，可以维持实验体系的pH值稳定。浙江有酚红缓冲液答疑解惑

缓冲液使用中的注意事项。浙江有酚红缓冲液答疑解惑

制备PBS缓冲液的方法制备PBS缓冲液非常简单，以下是制备1升10×PBS缓冲液的方法：13.将800ml的去离子水加入大容量烧杯中。14.将8g的氯化钠（NaCl）和0.2g的磷酸二氢钾（KH2PO4）加入烧杯中，用玻璃棒搅拌均匀。15.用去离子水将溶液补足至1升，继续搅拌至完全溶解。16.用盖子或保鲜膜覆盖烧杯，将烧杯放入冰箱中冷藏保存。注：若需要使用1×PBS缓冲液，只需取10×PBS缓冲液适量稀释即可。

制备PBS缓冲液的方法制备PBS缓冲液非常简单，以下是制备1升10×PBS缓冲液的方法：13.将800ml的去离子水加入大容量烧杯中。14.将8g的氯化钠（NaCl）和0.2g的磷酸二氢钾（KH2PO4）加入烧杯中，用玻璃棒搅拌均匀。15.用去离子水将溶液补足至1升，继续搅拌至完全溶解。16.用盖子或保鲜膜覆盖烧杯，将烧杯放入冰箱中冷藏保存。注：若需要使用1×PBS缓冲液，只需取10×PBS缓冲液适量稀释即可。 浙江有酚红缓冲液答疑解惑