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细胞复苏

1. 从液氮容器中取出冻存管，直接浸入37℃温水中，并不时摇动令其尽快融化。

2. 从37℃水浴中取出冻存管，打开盖子，用吸管吸出细胞悬液，加到离心管并滴加10倍以上培养液，混匀；

3. 离心， 1000rpm，5min；

4. 弃去上清液，加入含10%小牛血清培养液重悬细胞，计数，调整细胞密度，接种培养瓶，37℃培养箱静置培养；

5. 次日更换一次培养液，继续培养。注意事项1．从增殖期到形成致密的单层细胞以前的培养细胞都可以用于冻存，但比较好为对数生长期细胞。在冻存前***比较好换一次培养液；

2．将冻存管放入液氮容器或从中取出时，要做好防护工作，以免***；

3．冻存和复苏比较好用新配制的培养液。 细胞冻存液无动物来源血清成分，化学成分明确。上海hela细胞冻存液价钱

4. 逐滴加入5 - 7 mL的预热的培养基到15 mL的离心管中，加入的同时轻轻混匀。

5. 室温以300 x g离心5分钟。

6. 吸出培养基，使细胞沉淀完好无损。使用2 mL血清移液管轻轻将细胞沉淀重悬于1 mL的培养基中。

7. 将0.5 mL的细胞混合物转移到含有培养基的预包被的6孔板的培养孔中（例如，每个冻冻管可以铺板两个孔）。

8. 将培养板放入37°C培养箱。快速前后左右的摇晃培养板数次，将细胞聚集体分布均匀。24小时内不要移动培养板。

注意：解冻复苏后如果只能观察到少数的未分化的集落 上海hela细胞冻存液价钱细胞加冻存液没有及时冻存会如何?

细胞冻存及复苏的基本原则是慢冻快融，实验证明这样可以比较大限度的保存细胞活力。目前细胞冻存多采用甘油或二甲基亚砜作保护剂，这两种物质能提高细胞膜对水的通透性，加上缓慢冷冻可使细胞内的水分渗出细胞外，减少细胞内冰晶的形成，从而减少由于冰晶形成造成的细胞损伤。复苏细胞应采用快速融化的方法，这样可以保证细胞外结晶在很短的时间内即融化，避免由于缓慢融化使水分渗入细胞内形成胞内再结晶对细胞造成损伤。

细胞冻存和复苏的原则：

慢冻速融，这样更加有利于保持细胞的活力。冻存细胞不加任何保护剂，会导致细胞内冰晶的产生，从而使细胞产生内源性的机械损伤，引起细胞内环境渗透压，PH，电解质等的改变，进而促使细胞死亡。

脱水当生物材料处于上述条件（2）的情况下，细胞脱水则会开放相关压力对细胞直接伤害的“大门”。4.细胞内冰晶的形成虽然一些***或组织能够耐受细胞外的冰晶，但是在冻存过程的中如果在细胞内形成了任何微小冰晶时对细胞来说都是致命的。冻存液冻存保护剂（cryoprotectant）又或者说是冻存液是一种用来保护生物组织免受冻存伤害的物质。其实在现实生活中，自然的冻存保护剂可以在北极或者南极的昆虫，鱼类，两栖动物等生物中找到，这样的保护剂（抗冻复合物，抗冻蛋白）能够在他们的身体中使寒冷冬季的严寒伤害降到比较低细胞冻存及复苏的基本原则是慢冻快融，实验证明这样可以比较大限度的保存细胞活力。

细胞培养的传代及日常维持过程中，在培养器具、培养液及各种准备工作方面都需大量的耗费，而且细胞一旦离开***开始原代培养，它的各种生物特性都将逐渐发生变化并随着传代次数的增加和体外环境条件的变化而不断有新的变化。因此及时进行细胞冻存十分必要。细胞冷冻储存在-70℃冰箱中可以保存一年之久；细胞储存在液氮中，温度达-196℃，理论上储存时间是无限的。细胞冻存时向培养基中加入保护剂--终浓度5%．15%的甘油或二甲基亚砜(DMSO)，可使溶液冰点降低，加之在缓慢冻结条件下，细胞内水分透出，减少了冰晶形成，从而避免细胞损伤。细胞冻存液可以放多久?上海hela细胞冻存液价钱

无血清快速细胞冻存液加入适量的细胞冻存液于离心管中，调节细胞浓度至1~5×106 /ml;上海hela细胞冻存液价钱

无血清细胞冻存液产品介绍：无血清细胞冻存液是一款针对细胞冻存和复苏所研发的即用型细胞冻存液。该冻存液采用独特的冻存配方，包括DMSO在内的冻存保护剂复合物，**降低了细胞在冻存过程中冰晶对于细胞的损伤。冻存液中添加了葡萄糖，氨基酸等各种细胞营养成分，***提高了细胞的活力和复苏率。无血清细胞冻存液不含牛血清，无任何动物源组分，可维持干细胞低分化状态，并且可减少各类***和支原体污染的风险，确保细胞冻存安全。与传统细胞冻存液相比，本产品重悬细胞后可直接冻存于-80℃，无需程序降温。上海hela细胞冻存液价钱

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