宁夏专注dMMR抗体检测试剂经验丰富

    将培养的菌液转接到500mllb液体培养基混合，37℃，200rpm，培养至od＝，iptg()低温过夜诱导。400ml大离心筒，6000rpm，离心5min收集菌体，弃上清。沉淀用20-30ml10mmtris-hcl()和终浓度为，超声破碎菌体。12000rpm离心20分钟，取离心上清上样到ni-nta镍柱(qiagen)进行纯化，之后分别用含15mm咪唑、60mm咪唑、300mm咪唑的10mmtris-hcl()(含)溶液洗脱，分别收集蛋白峰，电泳检测，备用；所制备的重组蛋白，蛋白浓度为，纯度为80％。图1为纯化后重组msh6蛋白的电泳结果图,其中m：分子量标记、1：：、实施例2abm58060-20a2-pu杂交瘤细胞系的建立一、免疫将实施例1中的重组蛋白用弗氏完全佐剂(sigma公司，f5881)乳化，免疫icr小鼠(购自北京维通利华实验动物技术有限公司)，腹部皮下注射每只小鼠6点，剂量为60μg/只。每14天加强免疫一次，抗原使用弗氏非完全佐剂(sigma公司，f5506)乳化，剂量为30μg/只。第3次加强免疫后7天，msh6-1蛋白，2ug/ml，4℃包被过夜，elisa检测小鼠血清中抗免疫原的多抗效价，效价比较高的小鼠以尾静脉注射冲击免疫，抗原用生理盐水混匀，剂量为50μg/只。二、细胞融合：无菌制备免疫达标的小鼠脾细胞悬液，与小鼠骨髓瘤细胞sp2/0。迈杰转化医学为全球合作伙伴提供包括生物标记物挖掘、药物靶点验证、伴随诊断开发等一体化解决方案。宁夏专注dMMR抗体检测试剂经验丰富

    SepulvedaAR等综合众多研究发现其他的RAS突变（包括KRAS3、4号外显子及NRAS的2、3、4外显子）的突变率约为。KRAS属于RAS基因家族（HRAS，NRAS，KRAS）中的一员，编码GTP/CDP结合蛋白，其作为EGFR下游信号通路的重要效应分子，主要***RAF-MAPK通路进行后续信号转导，参与细胞的生长调控，在抗细胞调亡，介导**侵袭和转移，乃至**引起的新血管生成中起作用。结直肠ai中约32%~40%的患者存在KRAS基因突变，存在KRAS突变的患者中约85%~90%的突变集中在第2号外显子的12、13密码子上，其余突变中约5%发生在61密码子上，5%发生在146外显子上。结肠直肠ai中KRAS基因的突变状态对靶向***的选择有着决定性的作用。CRYSTAL研究将西妥昔单抗联合FOLFIRI方案化疗对比单纯化疗，结果发现KRAS突变状态与***反应率相关，在RAS野生型的患者中，联合组与单纯化疗组的ORR分别为（P＜），中位PFS分别为（P＜），中位OS分别为（P＜）。而在RAS突变型的患者中，西妥昔单抗的加入并未获得生存优势，联合组与单纯化疗组的ORR分别为（P=），中位PFS分别为（P=），中位OS分别为（P=）。新RAS突变的患者亦是如此，西妥昔单抗的加入同样未取得生存获益，联合组与单纯化疗组的ORR分别为（P=）。宁夏专注dMMR抗体检测试剂经验丰富MSH6抗体试剂 苏苏械备20180569号.

    RAF***对多种**的发生、发展产生重要影响，RAF突变以BRAF常见，BRAF是RAS-RAF-MAPK信号通路的重要基因，BRAF突变常见于V600E位点，其在结肠ai的突变率为。BRAF突变的ai症患者中右半结肠ai占95%，在BRAF野生型的ai症患者中右半结肠ai患者占48%。研究发现在右半结肠aiBRAF突变率为，左半结肠ai、直肠ai的突变率分别为、。BRAF突变与右半结肠ai相关，并且BRAF基因突变和位置有***的线性相关关系，随着**位置由升结肠移至直肠，BRAF的突变率由40%降至不到。2.预测EGFR***作用NicolantonioF等人对113例Cetuximab耐药的转移性结肠ai患者进行了检测，发现对这两种药物耐受的患者，有30%~40%存在KRAS突变，而野生型的KRAS患者中有14%发生BRAFV600E突变。BRAF突变者对这两种药存在耐药，且生存率较其它患者明显降低。但一项关于CRYSTAL和OPUS试验的meta分析发现BRAF突变似乎不影响西妥昔单抗的疗效，**是一个重要的预后指标。3.预测预后无论是早期还是晚期转移CRC，BRAF突变状态都是较强的生存预测因素，与KRAS基因突变相比，BRAF基因突变常见于尚未发生远处转移的结肠ai，以Ⅱ、Ⅲ期CRC患者多见，BRAF突变型CRC的恶性程度高、淋巴结转移率和局部晚期发生率高。

    使MSI检测的灵敏性、特异性和检测的便利度都有了明显进步。3．错配修复蛋白免疫组织化学检测与PCR-MSI检测的优缺点：文献报道错配修复蛋白免疫组织化学检测与PCR-MSI检测结果的符合率非常高，达％，因此采用任何一种方法作为MSI-Hliu的筛查方法均可接受。相比之下，免疫组织化学法：(1)简便、经济、快捷、稳定，符合病理科日常工作流程，多数基层病理科均可开展；(2)所需组织量少，活检标本亦可检测，且检测结果与切除标本检测结果一致；(3)可直接提示发生缺陷的错配修复蛋白类型，对于后续进行错配修复基因胚系突变检测以确诊Lynch综合征有明确的指向性；(4)少数MSH6胚系突变病例的liu由于错配修复系统的功能冗余作用可不表现为MSI，但免疫组织化学可检出蛋白表达缺失，因而可弥补PCR-MSI检测方法的局限性。PCR-MSI检测虽然相对复杂，费用相对较高，但优点是直接反映liu的MSI状态，而且对于少数错义突变导致蛋白功能异常但并不影响蛋白的转录和抗原性时，免疫组织化学检测可出现假阳性，而PCR-MSI检测正好可以弥补。四、***检测MSI结直肠ai的必要性及推荐检测流程区分MSI结直肠ai的临床意义包括以下三个方面。1．提示预后：临床研究发现，在Ⅱ期结直肠ai中。迈杰转化医学拥有全技术平台及丰富的伴随诊断开发经验，为药企合作伙伴提供一体化开发服务。

dMMR（MSH6/MLH1/PMS2/MSH2）抗体检测试剂错配修复〈MismatchRepair,MMR)发生于DNA复制、重组及损伤修复过程，能够识别和修复错误的插入、缺失和整合。人体内常见的4种错配修复蛋白，即hMLH1、hMSH2、hMSH6、hPMS2协同发挥DNA错配修复功能。MMR系统任何一种蛋白缺失，都会导致DNA错配修复功能缺陷(MismatchRepairDeficiency,dMMR)，产生复制错误或微卫显不稳定(MicrosatelliteInstability,MSI)，进而诱导liu发生。

迈杰转化医学的dMMR抗体检测试剂采用免疫组织化学法（IHC）检测liu组织中MLH1、MSH2、MSH6和、PMS2四种蛋白的表达。

备案号

PMS2抗体试剂苏苏械备20180570号

MSH6抗体试剂苏苏械备20180569号

MSH2抗体试剂苏苏械备20180568号

MLH1抗体试剂苏苏械备20180519号

产品特点**使用北欧免疫组化质控中心NordiQC推荐的IHC抗体组合。精确经多平台平行验证（MSI-PCR、MSI-NGS)，一致性高，特异性好普适覆盖多个主流IHC自动染色平台，适用范围广便捷方法简单易行，医保覆盖。 迈杰转化医学致力于解决创新药物的研发痛点及患者的用药痛点，助力精z准医疗！宁夏专注dMMR抗体检测试剂经验丰富

迈杰转化医学旨在发现或验证有临床转化价值的新靶点，揭示疾病发病，药物作用，耐药等新的生物学机制。宁夏专注dMMR抗体检测试剂经验丰富

    免疫组织化学的方法具有方便、快捷、稳定等优点并且对Lynch综合征的确诊具有指向性，因此被***接收，目前已几乎替代前者。上述MSI的传统检测方法不能用于对Lynch综合征的确诊，而免疫组织化学方法因直接检测相关蛋白对Lynch综合征具有***的指向性。为了提高对Lynch综合征的指向性，有学者建议将EpCAM列入错配修复蛋白检测行列。然而对Lynch综合征的确诊必需依赖于对MLH1、MSH2、MSH6、PMS2以及EpCAM基因进行突变或缺失的检查结果。四、错配修复蛋白染色错配修复蛋白染色结果判断应注意以下几点:1）着色部位是否为核；2）内对照（上皮细胞：正常肠上皮特别是腺体基底部细胞；间质细胞：淋巴细胞、平滑肌细胞、血管内皮细胞等）是否阳性；3）**细胞的细胞核是否为阳性（通常任何**细胞表达即判断为该错配修复蛋白阳性）错配修复蛋白结果解读:一种或多种错配修复蛋白表达缺失提示为MSI-H**。通常MLH1功能缺陷会合并PMS2表达缺失，而MSH2缺陷则常合并MSH6表达缺失，反之不然。宁夏专注dMMR抗体检测试剂经验丰富