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细胞冷冻注意事项：  （1）欲冷冻保存之细胞应在生长良好(logphase)且存活率高之状态，约为80～90％致密度。冷冻前检测细胞是否仍保有其特有性质，例如hybridoma应在冷冻保存前一至二日测试是否有抗体之产生。    上海博世学汽车美容贴膜，学历+技能，保障就业 广告 学汽车美容贴膜，上海博世汽车美容培训班，学费免息分期付款，0基础即可入学， 查看详情 >  （2）细胞在液氮中可长期冻存无限时间，而不会影响细胞活力；在-70度可保存数月。 细胞冻存液的原理是什么?北京配制好的细胞冻存液的ph

细胞复苏佩戴眼镜和手套，从液氮中取出冻存的细胞管。迅速放入38℃水浴中，并不时摇动，在1分钟内使其完全融化，然后在无菌条件下取出细胞。1200rpm/min离心5-10min，弃去上清，加入适量培养液混匀后接种于培养瓶中，次日更换一次培养液。

细胞冻存和复苏操作步骤：

细胞冻存和复苏采取“慢冻快融”的原则，慢速冷冻可使细胞内的水份渗出细胞外，减少细胞内形成冰晶的机会，快融以保证细胞外结晶快速融化，避免慢速融化水份渗入细胞内，再次形成胞内冰晶造成对细胞的损伤。 北京配制好的细胞冻存液的ph细胞冻存液配制主要成分.

4. 逐滴加入5 - 7 mL的预热的培养基到15 mL的离心管中，加入的同时轻轻混匀。

5. 室温以300 x g离心5分钟。

6. 吸出培养基，使细胞沉淀完好无损。使用2 mL血清移液管轻轻将细胞沉淀重悬于1 mL的培养基中。

7. 将0.5 mL的细胞混合物转移到含有培养基的预包被的6孔板的培养孔中（例如，每个冻冻管可以铺板两个孔）。

8. 将培养板放入37°C培养箱。快速前后左右的摇晃培养板数次，将细胞聚集体分布均匀。24小时内不要移动培养板。

注意：解冻复苏后如果只能观察到少数的未分化的集落

注意冷冻保护剂之品质。DMSO应为试剂级等级，无菌且无色(以0.22micron FGLP Telflon过滤或是直接购买无菌产品，如Sigma D-2650)，以5～10ml小体积分装，4℃避光保存，勿作多次解冻。Glycerol亦应为试剂级等级，以高压蒸汽灭菌后避光保存。在开启后一年内使用，因长期储存后对细胞会有毒性。本方法中先制备双倍冻存液，可避免DMSO直接加入时释放的热量对细胞的损伤。缓慢逐滴加入细胞悬液是使细胞逐步适应高渗，可降低细胞受损。DMSO可能引起部分白血病细胞株的分化，可换用10%甘油冻存。 采取逐级降温保存：4℃放置20min，-20℃放置30min，-70℃ 过夜，***置于液氮罐中长期存储。

3、取待冻存的细胞用胰蛋白酶消化（方法见细胞的传代部分）。用含血清的培养基将细胞冲洗下来，将细胞悬液吸到无菌离心管中，800r/min离心5min，弃上清，收集细胞沉淀。如果是悬浮生长的细胞，则可直接离心收集细胞。

4、在沉淀中加入适量冻存液制成细胞悬液，细胞浓度宜大，300万/mL左右，一般一个中方瓶中的细胞浓缩至1mL，冻存液中为宜。

5、细胞悬液装入冻存管中。用封口膜封裹瓶口，做好标记。

6、冻存管在4℃下存放30min，转放-20℃中30min，再转入-70℃过夜，之后即可放入液氮中长久保存，注意进行登记。 复苏细胞应采用快速融化的方法，这样可以保证细胞外结晶在很短的时间内即融化.北京配制好的细胞冻存液的ph

细胞冻存可以直接放液氮可以吗?北京配制好的细胞冻存液的ph

上海儒安生物科技有限公司抗体去除液

产品简介：

蛋白印迹膜再生液，用于 Western blot中转移了蛋白后膜的重复利用。在 Western blot 中完成了一

抗二抗结合和后续的化学发光检测后，有时还需要检测Actin 、Tubulin 等表达量相对稳定的蛋白作为参

照，或检测其它蛋白进行比较。通过使用蛋白印迹膜再生液中特殊成份解离一抗二抗与印迹膜上抗原的结

合从而去除一抗二抗，即可非常方便地重新利用同一张膜检测其它蛋白。与重新跑一个SDS-PAGE胶比较，

不但省时省力，而且可以消除重新上样而带来的误差，使可比性更强。

不含有常用的 beta-巯基乙醇， 无毒无味无害， 室温下使用， 可对同一膜进行 5 次以上的 Western Blot

检测. 较快 15-30 钟就可以完成全过程。

使用说明：

1. 用 TBS-T 将膜洗 10 分钟×3 次，将膜充分浸泡于适当体积再生液中，室温孵育 15－30 分钟，并不时

摇晃，洗脱某些抗体时需要较长的时间 30－60min。

2. 用镊子取出膜，用 TBS-T 洗涤缓冲液快速淋洗膜一次，然后洗膜 5min。

3. 此时膜上结合的抗体己被去处，用脱脂奶粉或 BSA 封闭，进行下一轮抗体孵育。 北京配制好的细胞冻存液的ph

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