长春BD VDJ单细胞转录组测序

由于高通量测序实验方法相关的测序成本，使得单细胞实验往往非常昂贵，烈冰生物BD Rhapsody单细胞测序服务珍视您的每一份样本，在平台搭建前，我们测试评估了BD Rhapsody的性能，与BD官方公布的数据结合来看，将人293T和小鼠NIH/3T3细胞的1:1混合物以不同浓度上样到BD Rhapsody卡式芯片上。存储的cDNA分子普遍扩增并进行低通量测序（每个细胞月8700个读数）。在测序数据中检测到1109个细胞的上样条件下，每个细胞中，来自每个细胞的平均99.4%的分子经检测为人或小鼠，这表明微孔之间的串扰非常小，在测序数据中检测到1000个或更少细胞的上样密度下，多重态发生率接近零，并且在15000个细胞下小于5%。烈冰生物为您提供多平台一站式全流程BD单细胞测序服务。长春BD VDJ单细胞转录组测序

根据烈冰多年单细胞测序服务经验，为什么不建议您一味的追求高细胞数量的捕获：单细胞测序所有的分析都是基于细胞聚类进行，而细胞聚类是在区分cell和non-cell后，获得细胞基因表达谱，通过降维（pca），无监督聚类以及可视化（t-SNE）得到的。进行细胞聚类时需要考虑到每个细胞的基因表达模式，因此即使是相同的数据，在剔除几个细胞的情况下，前后获得的聚类图也会出现明显不同。而当细胞捕获数过多时，无论是假阴性和假阳性数据还是多细胞数据，都会对正常细胞聚类产生影响，造成聚类结果失真。这也是很多文章，特别是很多高分文章，为什么单个样本捕获细胞数在2000-3000的原因了。烈冰建议单个样本捕获细胞数在3000-5000个时，数据量在100G左右时，可以满足分析和文章发表的多重需求。武汉single cell 单细胞测序服务此外，烈冰开展了单细胞转录组、单细胞多组学以及空间转录组等多种产品在内的全套科研解决方案，欢迎垂询。

为什么需要单细胞分辨率？ 生物学就像宇宙一样。它非常复杂，有许多独特的单体，也就是细胞。这些细胞相互作用并扮演不同的角色，在更大的体系中构建并驱动多个过程。就像伽利略探索宇宙的努力一样，发现和定义这些细胞也需要高分辨率的工具，才能解开促成生物学复杂性的基因表达异质性。单细胞测序能够在以一个细胞为功能单位中开展生物学研究，阐明具体细节，构建出一幅更大、更精细的图谱，说明导致产生某种外在表型的不同类型的分子和细胞之间是如何相互作用的：患者为什么会复发？是什么让这种疫苗能够有效防止传染等等诸多问题。

针对单细胞测序的细胞上样数，为什么不建议捕获到的细胞数量越高越好？一味地追求高数量的细胞捕获可能会存在一些问题。例如在上机细胞悬液浓度固定时，如果目标细胞捕获数增加到8000甚至10000，上样细胞悬液体积势必增加，在细胞悬液质量不是很理想（细胞活性<90%、碎片率>5%、结团率均>5%）的情况下，引入的背景信号会增加，分析结果不理想的直接体现包括：cell、non-cell无法有效区分和Fraction reads in cells偏低。当cell和non-cell无法有效区分时，会使得数据出现假阳性和假阴性结果！当目标细胞捕获数很大时，多细胞率会增加，数据分析时，此部分“cell”表现为基因检测数和UMI检测数是正常cell的N倍（N是一个GEM包裹的细胞数），导致所有细胞的统计数据（单个细胞基因检测中位数、单个细胞UMI检测中位数）虚高。此部分“cell”虽然可以通过设置数据分析阈值进行过滤，但是容易会有此类数据的残留和正常高基因检测细胞的人为去除！烈冰测序服务已助力300余篇国际期刊研究文章发表。

烈冰生物为您的实验定制工作流程： 对于不同用户和实验，单细胞实验工作流程往往需要不同程度的样本操作、质量和通量。BD仪器选项可以根据具体需求进行配置。烈冰生物搭建BD FACS流式分选平台（如 BD FACSMelody），是上游样本富集的良好选择。此外，我们具备BD Rhapsody单细胞成像仪提供自动化细胞计数和细胞样本活性测试，帮助用户制备适用于Cartridge微孔板单细胞捕获浓度的样本。扫描仪提供了微孔板上磁珠捕获细胞的计数。BD Rhapsody 样品上样工作站轻巧便携，可在实验室内轻松移动。搭配烈冰倾情研发多年的成果NovelBrain生物信息大数据分析系统，完成测序数据的生物信息分析和结果可视化呈现。这些工具包括 UMI 分析算法和可视化工具，即使没有经验的用户也可分析和理解单细胞数据。单细胞多组学测序可识别重要的转录因子，进行谱系和发育追踪。南京BD Rhapsody单细胞多组学测序

搭配BD FACSMelody流式分选仪，全线搭建BD Rahpsody单细胞测序平台。长春BD VDJ单细胞转录组测序

针对BD Rhapsody单细胞捕获平台，烈冰生物提供专业的优化试剂和专业知识：BD Rhapsody试剂是转为 Rhapsody 系统设计，旦性能已得到验证的产品，因此研究人员可以专注于解决生物学问题，而不必花费时间应对多组学分析的技术障碍。此外，我们还提基于BD平台的单细胞多组学服务，如Ab-Seq检测试剂盒使用的抗体已在流式细胞分析中得到充分研究，这使得研究人员能够建立真值并迅速加深对生物学系统的理解。作为BD中国单细胞联合实验室的合作伙伴，我们将继续扩展检测试剂盒和试剂产品组合的范围，以支持前沿多组学分析。我们经验丰富的专业客户服务团队可在多组学分析的各个方面为您提供帮助。长春BD VDJ单细胞转录组测序

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