青海标准dMMR抗体检测试剂来电咨询

时间:2022年07月20日 来源:

    筛选出分泌特定单克隆抗体的杂交瘤细胞株abm58060-20a2-pu。将此细胞株转入t-75培养瓶中扩增至对数生长期保种或进行后续实验。实施例3腹水诱生法制备单克隆抗体一、腹水制备对数生长期细胞用无血清培养基洗涤并悬起,计数~5×105,1ml。悬浮的细胞腹腔注射事先用石蜡油致敏的小鼠。7天后开始收集腹水。取出的腹水于4℃离心4000rpm,10min。小心吸出中间的腹水收集于离心管中,4℃或-20℃保存。二、单克隆抗体的纯化用hitraprproteinaff(ge公司)亲和层析法按说明书从腹水中纯化抗体。sds-page胶鉴定纯度,bradford法测定浓度。纯化的抗体保存于-20℃。实施例4单克隆抗体特性鉴定一、亚型鉴定用100mmpbs()稀释包被羊抗鼠igg(北京中杉金桥生物技术有限公司)至μg/ml,每孔加100μl,4℃,过夜。倾空液体,用含%tween的pbs(pbs-t)洗3次,每孔加入200μl封闭液(含2%bsa和3%蔗糖的pbs),37℃孵育1h。倾空液体,用pbs-t清洗3次。每孔加入,37℃孵育1h。倾空液体用pbs-t清洗3次。用封闭液1:1000稀释hrp标记的羊抗鼠(κ,λ)抗体或1:2000稀释hrp标记的羊抗鼠(igm,igg1,igg2b,igg2b,igg3,iga)抗体,37℃孵育1h。倾空液体,用pbs-t清洗3次。迈杰中心实验室设有SLAN 96P、Rotor-Gene Q、ABI 7500、ABI ViiA7、Roche z480等实时荧光定量PCR仪及数字PCR仪!青海标准dMMR抗体检测试剂来电咨询

    1微卫星(microsatellites)不稳定性微卫星(microsatellites)又称简单重复序列,是存在于基因组中的一些小片段核苷酸的重复序列,重复单位一般由1~6个核苷酸组成,重复次数不超过60次,具有高突变性。DNA在复制过程中,尤其是微卫星,可能会出现碱基错配等错误,这些错误累积起来并一代代的传递下去,**终会产生基因突变进而导致细胞ai变。这种在DNA复制过程中产生的一些简单重复序列的插入或缺失,被称为微卫星不稳定性(microsatelliteinstability,MSI)[1]。2MSI与错配修复(MMR)蛋白间的关系DNA错配修复(Mismathrepair,MMR)系统由一系列特异性修复DNA碱基错配的酶分子(MMR蛋白)组成。MMR蛋白的主要功能是修复DNA复制过程中产生的错配,包括单碱基错配和2个以上的插入/缺失错配,从而保持遗传物质的完整性和稳定性,避免遗传物质发生突变。据目前报道:涉及人类DNA错配修复的MMR蛋白主要有5个,其编码基因分别为MLH1、PMS1、PMS2、MSH2和MSH6。MMR系统会对在DNA复制过程中的碱基错配等错误进行纠正,一旦修复系统失效,基因突变的风险便会提高。因此,MMR基因突变后,DNA复制时的过程中便会发生MSI[2,3]。3MSI判定标准MSI的检测方法很多。福建推荐dMMR抗体检测试剂创新服务迈杰转化医学开发的伴随诊断试剂盒,基因突变检测试剂盒,检测范围全。

    免疫组织化学的方法具有方便、快捷、稳定等优点并且对Lynch综合征的确诊具有指向性,因此被***接收,目前已几乎替代前者。上述MSI的传统检测方法不能用于对Lynch综合征的确诊,而免疫组织化学方法因直接检测相关蛋白对Lynch综合征具有***的指向性。为了提高对Lynch综合征的指向性,有学者建议将EpCAM列入错配修复蛋白检测行列。然而对Lynch综合征的确诊必需依赖于对MLH1、MSH2、MSH6、PMS2以及EpCAM基因进行突变或缺失的检查结果。四、错配修复蛋白染色错配修复蛋白染色结果判断应注意以下几点:1)着色部位是否为核;2)内对照(上皮细胞:正常肠上皮特别是腺体基底部细胞;间质细胞:淋巴细胞、平滑肌细胞、血管内皮细胞等)是否阳性;3)**细胞的细胞核是否为阳性(通常任何**细胞表达即判断为该错配修复蛋白阳性)错配修复蛋白结果解读:一种或多种错配修复蛋白表达缺失提示为MSI-H**。通常MLH1功能缺陷会合并PMS2表达缺失,而MSH2缺陷则常合并MSH6表达缺失,反之不然。

    在临床中,对于Ⅱ期结肠ai病人,考虑使用5-Fu单药化疗时,主要考虑因素是什么?可能有的医生会说,「Soeasy!检测下MMR啊,看看是dMMR还是pMMR」。来吧,我们看1个病例患者女,51岁,诊断为T3N0M0(伴有普危因素),免疫组化结果:HER2(1+),GPC3(-),MSH2(+),MSH6(+),PMS2(+),MLH1(+),CK19(-),CK20(+),Ki67(60%+)。这名患者该不该用单药5-Fu进行辅助化疗?一拿到免疫组化结果,很多医生的表情是这样的:大家都知道,MSI-H/dMMR患者不能从单药5-Fu的***中获益。但问题是,面对由英文字母、数字、括号和加减号组成的免疫组化结果,如何确定是dMMR还是pMMR?到底怎样算H-MSI,怎样算L-MSI,怎样又算MS-S?下面我们就来解决这个问题。MMR基因是DNA错配修复基因,它的表达缺失可引起DNA复制过程中错配的累积,导致微卫星不稳定(MSI)的发生,约15%的结直肠ai是经由MSI途径引发的。dMMR是MMR表达缺失,pMMR是MMR表达正常。dMMR表现为高频度微卫星不稳定(MSI-H),pMMR表现为低频度微卫星不稳定(MSI-L)或微卫星稳定(MS-S)。目前,**常用的筛查结直肠aiMMR表达有无缺失的方法有2种:免疫组化检测MMR相关蛋白的表达,以及PCR检测多个微卫星位点以判断有否存在MSI。迈杰转化医学围绕生物标志物研究、伴随诊断开发,建立了完善的核酸组学、蛋白组学、细胞组学技术平台。

    msh6全称为mutshomolog6(),是一种错配修复基因,定位于2号染色体的p臂16位上。dna错配修复对于超时遗传信息完整性的维持是非常必要的。微卫星重现性的改变是由于dna复制时铰链不对位产生滑动而导致的结果,又称为微卫星不稳定性。突变型的错配修复基因常表达于高频度微卫星不稳定(msi-h)患者中,与常染色体的显性遗传性疾病相关,称为遗传性非息肉病性结直肠ai(hnpcc),也可见于散发性(msi-h)结直肠ai患者。错配修复(mmr)蛋白是一组细胞核内酶,存在于所有的增殖细胞内,参与发生了dna复制过程碱基错配的修复。这些蛋白形成复合物(异二聚体)结合于非正常的dna并启动***过程。mmr蛋白的丧失导致增殖细胞中dna复制错误的堆积,特别是位于短重复核苷酸序列基因组的区域,这种现象即为所谓的微卫星不稳定性(msi),因此,细胞中的mmr蛋白的缺失与微卫星高度不稳定(msi-h)密切相关,与此相反即是微卫星低度不稳定(msi-l)和微卫星稳定(mss)。人类已经认定的错配修复功能的基因有九个,其中五种和临床关系密切,因为在遗传性非息肉病性结直肠ai(hnpcc,又称lynch综合征)中可能发生突变,其中msh6发生频率9%。msh2与msh6形成异二聚体复合物,当msh2缺乏时,msh6蛋白也同样缺失。迈杰拥有StarLIMS实验室信息化管理系统,中心实验室获得了中国CNAS ISO 17025实验室认可、美国CAP认证。湖南专注dMMR抗体检测试剂创新服务

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    可能是由于蛋白的不稳定造成的。目前,其用途主要为:联合检测msh2、msh6、pms2、mlh1可用于lynchsyndrome(遗传性非息肉性结肠ai)的筛查。技术实现要素:发明人提供了一种抗msh6蛋白单克隆抗体,所述单克隆抗体重链和轻链可变区的氨基酸序列分别是。进一步地,所述单克隆抗体重链和轻链可变区氨基酸序列分别是。进一步地,所述单克隆抗体特异性识别msh6蛋白。进一步地,所述单克隆抗体由保藏号为cgmcc**7492的杂交瘤细胞系产生。所述细胞株为小鼠杂交瘤细胞系abm58060-20a2-pu,分类命名为:小鼠杂交瘤细胞系,该细胞系已于2019年04月3日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏,地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所。进一步地,所述抗msh6蛋白为小鼠igg2b亚型单克隆抗体。发明人还提供了一种抗msh6蛋白单克隆抗体的制备方法,其免疫小鼠所用的抗原为seqid**所示核苷酸序列编码,经由大肠杆菌重组表达的重组蛋白。发明人还提供了一株分泌抗msh6蛋白的杂交瘤细胞系,所述细胞株为小鼠杂交瘤细胞系abm58060-20a2-pu,所述细胞系保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏号为:cgmcc**7492。青海标准dMMR抗体检测试剂来电咨询

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