BD Rhapsody单细胞平台

关于BD Rhapsody单细胞平台的样本类型和样本制备 ：在上机前需要注意细胞消化后的细胞团块，获得分离良好的细胞悬液、且细胞活力高（＞70%）；此外，了解您所研究细胞的大小范围也很重要。细胞大小通常与细胞表达的转录本数量有关。各种尺寸不同的细胞（一般直径不大于50μm）均可与我们基因表达解决方案中使用的BD Rhapsody平台兼容。一般来说，细胞制备方案将根据组织来源和细胞类型而变化。每种组织类型都是独特的，因此，必须在开始任何单细胞实验之前优化样本制备，烈冰多年样本解离消化经验，累积10+物种、50+组织的消化protocol，若您的样本为组织，且尚未成功将组织样本消化成单细胞悬液，烈冰将尽可能提供技术及实验上的帮助。单细胞测序技术提供了单个细胞水平下的科学研究视角。BD Rhapsody单细胞平台

根据烈冰多年单细胞测序服务经验，为什么不建议您一味的追求高细胞数量的捕获：单细胞测序所有的分析都是基于细胞聚类进行，而细胞聚类是在区分cell和non-cell后，获得细胞基因表达谱，通过降维（pca），无监督聚类以及可视化（t-SNE）得到的。进行细胞聚类时需要考虑到每个细胞的基因表达模式，因此即使是相同的数据，在剔除几个细胞的情况下，前后获得的聚类图也会出现明显不同。而当细胞捕获数过多时，无论是假阴性和假阳性数据还是多细胞数据，都会对正常细胞聚类产生影响，造成聚类结果失真。这也是很多文章，特别是很多高分文章，为什么单个样本捕获细胞数在2000-3000的原因了。烈冰建议单个样本捕获细胞数在3000-5000个时，数据量在100G左右时，可以满足分析和文章发表的多重需求。湖北BD单细胞实验服务单个细胞的基因结构和基因表达状态，并鉴定细胞的类型。

现有的单细胞测序技术阵营在几个主要领域存在差别。一个是基于微流控通道的细胞与Beads的在通道内的动态结合，通过油相水相不相容的特点将结合了的细胞和Beads进行分隔，在这个空间，单个细胞的内容物释放，转录本或其他生物分析物被标记或添加索引，以便下游识别。BD Rhapsody单细胞测序平台采用静态微孔技术（Cyto-Seq具有类似的技术原理）。通过微孔板的物理分隔，将一个个单个细胞和带有标签的磁珠，一对一的“框”在微反应的物理平台中。这样，每一个细胞都会结合一个磁珠，那么在每一个磁珠中上长满了不同的Cell Barcode和UMI Barcode连接形成的序列，再加上一端PolyT的抓手，这个抓手就会使用oligo dT抓住mRNA构建文库。

烈冰生物单细胞测序服务，为您提供可视化质控系统，保证每次实验的可靠性：BD Rhapsody 扫描仪具有直接成像功能，可在工作流程的不同阶段进行质量控制，如细胞捕获率和细胞多态率（双细胞率）。成像仪指标可以确认起始细胞样本的质量，并确认微孔板工作流程中每个步骤的成功完成状态 ；在细胞裂解前的步骤中评估细胞活性；并对通过测序确定的细胞回收量进行可靠估算。利用这些信息，在进行高成本的下游测序之前，用户可根据需要改变方向并解决实验中遇到的问题。这些指标允许用户对不同工作日间的或者不同研究中心间的工作流程性能进行跟踪。单细胞测序技术的迅速发展和应用推广，为从多维度揭示疾病发展提供了强有力的工具。

样本制备后的保存 为了尽可能地减少转录组的变化，在对细胞进行清洗和计数后，单细胞悬液应当保存于冰上，直至用于后续的上机和文库制备步骤。在理想状况下，一旦制备好样本，应当在3min钟内将其用于下游步骤。然而，您还有必要了解各类细胞的不同性质，因为这可能会影响细胞应在冰上保存的时间，以及它们在制备后多久便应当被尽快使用。例如，有些细胞（如PBMC）如果在冰上放置一段时间，它们就开始形成团块。这些团块很难解离，增加了堵塞的风险，而且每个团块被当成单细胞计数，又降低了细胞计数的准确性。此外，有些细胞更加粘稠，形成团块的速度更快。对于这些细胞，必须尽量减少制备和使用之间的时间差。烈冰BD Rahpsody单细胞测序平台，助力您的深入科学探究。杭州单细胞服务机构

个性化制定测序项目方面，满足从检测基因到蛋白的多组学测序要求。BD Rhapsody单细胞平台

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