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    目前，NAFLD动物模型和细胞模型仍然是研究NAFLD发病机制及药物防治的重要手段。动物模型虽然能很好地模拟体内环境，但是存在造模周期长、个体差异大、实验结果难以控制等问题，而细胞模型个体差异小、影响因素较少、实验条件可控性强[8-11]。鉴于细胞模型能较好地克服动物模型的不利因素，因此，建立NAFLD体外细胞模型对于研究其发病机制，为进一步防治NAFLD具有重要的理论意义与普遍的实用价值。肝脂肪变性细胞模型是公认的研究NAFLD有效的细胞模型，目前多采用肝细胞株HepG2，通过给予不同比例与浓度的游离脂肪酸(freefattyacids,FFA)混合物(油酸∶棕榈酸=2∶1)，诱导造模[12-13]，但因HepG2细胞株来源于肿瘤细胞，与正常生理条件下的肝细胞仍存在着差异[14]。因此采用健康C57BL/6J小鼠的原代肝细胞建立脂肪变性细胞模型，旨在建立一种更接近于临床的肝细胞脂肪变性模型，为NAFLD的研究奠定基础。 上海中乔新舟 原代肝细胞值得信赖。欢迎来电咨询上海中乔新舟！甘肃兔肝细胞新西兰大白兔原代肝细胞购买

    原代肝细胞的分离与培养采用Seglen门静脉两步灌流法及其改良方法分离小鼠原代肝细胞，多次低速离心纯化肝实质细胞，采用单层胶原培养法进行体外培养[15-18]。具体操作：雄性C57BL/6J小鼠腹腔注射1%钠(50mg/kg)麻醉后，浸泡于75%乙醇中消毒1～2min，在无菌条件下(超净工作台中)剪开腹部并暴露下腔静脉与肝门静脉。将静脉留置针插入下腔静脉后，迅速剪断肝门静脉。用无钙无镁的PBS缓冲液(含EDTA)灌流约50mL，在整个过程中，灌流液的灌流速度保持在7～8mL/min，温度保持在37℃左右。待肝脏血液排出，肝脏变白后，用IV型胶原酶缓冲液()进行原位消化，灌注胶原酶时，先用镊子夹闭肝门静脉，待肝脏膨起后停顿30s再松开镊子，反复多次，共灌流约10mL，温度保持在37℃左右。灌流结束后，迅速将肝脏从体腔中取出并转移到含EDTA的预冷PBS缓冲液中洗去血污、摘除胆囊，随后转移至含10%胎牛血清的DMEM培养基的培养皿中。用镊子轻轻地撕开包膜，夹住肝蒂轻轻晃动使肝细胞充分释放，收集肝细胞悬液，用200目细胞筛网过滤。滤液在4℃、500r/min低速离心3min，弃上清。细胞沉淀用4～5mL的PBS缓冲液重悬后在4℃、500r/min离心1min，重复清洗3次后，使用台盼蓝检测细胞活率和产出。 河南原代肝细胞培养原代肝细胞服务哪家好？上海中乔新舟告诉您。欢迎来电咨询上海中乔新舟！

    小鼠原代肝细胞的分离与培养详细操作步骤，工作液配制：：：10%水合氯醛，三蒸水5ml（4℃保存，）（1L）：16401袋，，NaHCO32g，酸钠，加青霉素、链霉素，3nMinsulin15μl（），1nM1μl（1mM）1000ml水。调节PH值至，过滤除菌。（也可以用DMEM含酸钠培养基）μg/ml胶原溶液：1μl纯乙酸+μl水=（200μl乙酸+），过滤除菌。在(）。7.肝素2mg/ml:肝素钠20mg,水10ml。8.灌流夜1:50ml/次：Kreb液50ml,50mMEGTA液。9.灌流夜2:30ml/次：Kreb液30ml，μl，胶原酶I15mg(现用现加)。

细胞培养方法：1、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次；②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入完全培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。 原代肝细胞哪个性价比高？上海中乔新舟告诉您。

    培养的原代肝细胞正常时是什么形状的？大约要多久才能传代？原代细胞对培养基有什么特别的要求吗？（相对传代细胞而言）谢谢！鼠肝脏组织块法1，断头处死鼠，无菌分离肝组织，在冰浴下将肝组织用4度D-hank‘s也或不含BS的培养液洗净血污，剥除薄膜及纤维，将肝组织切为约1mm3小块。2，用上述液体尽量洗去残留虚无，一次清洗后800rpm离心4min，弃上清，加入消化液I（含1g/l胰蛋白酶，10g/lPVP，），37度孵育12分，再用培养液洗3次以去除胰酶，将消化好的肝组织块贴于25cm2培养瓶中，加少许汉100ml/lBS培养液置于37度，5%CO22-3h后再补充6ml韩100ml/lBS培养液，待组织周围出现细胞“生长晕”是该为含50ml/lBS培养液。3，细胞生长之单层时加入消化液II。 上海中乔新舟告诉您 原代肝细胞的选择方法。欢迎来电咨询上海中乔新舟！河南原代肝细胞培养

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新的化合物可能引起各类组织的毒性损伤，这些毒性可以在相应的2D或3D培养的细胞模型中进行早期检测，为药物研发提供重要参考资料。药物代谢与过程主要发生在肝脏，因此肝脏是易受到毒物影响的受累，肝脏毒性也是药物安全性检测时必须要测试的项目之一。原代肝细胞作为一种体外模型，在药学研究方面具有极大优势——能获得大量性状较为统一的样本，很好的保留了与体内一致的细胞色素P450酶的水平，基本维持了肝脏在体内时的代谢功能。无论是机理性研究还是肝毒性研究都非常合适。因此在药物研发的临床前阶段和临床阶段，在毒代动力学中，使用包括人类在内的哺乳动物的原代肝细胞，建立体外肝模型，是优先的研究方式。甘肃兔肝细胞新西兰大白兔原代肝细胞购买

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1、原代细胞：ScienCell（中国区正规一级代理）人源和动物源各种原代细胞。

2、培养基：原代细胞**低血清、无血清、无异源蛋白无动物成分培养基。

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