广州BD VDJ单细胞实验服务

根据烈冰多年单细胞测序服务经验，为什么不建议您一味的追求高细胞数量的捕获：单细胞测序所有的分析都是基于细胞聚类进行，而细胞聚类是在区分cell和non-cell后，获得细胞基因表达谱，通过降维（pca），无监督聚类以及可视化（t-SNE）得到的。进行细胞聚类时需要考虑到每个细胞的基因表达模式，因此即使是相同的数据，在剔除几个细胞的情况下，前后获得的聚类图也会出现明显不同。而当细胞捕获数过多时，无论是假阴性和假阳性数据还是多细胞数据，都会对正常细胞聚类产生影响，造成聚类结果失真。这也是很多文章，特别是很多高分文章，为什么单个样本捕获细胞数在2000-3000的原因了。烈冰建议单个样本捕获细胞数在3000-5000个时，数据量在100G左右时，可以满足分析和文章发表的多重需求。截至2022年6月，烈冰助力发表单细胞测序文章30+篇。广州BD VDJ单细胞实验服务

烈冰与国内高校、研究所、医院和药企单位开展深度合作，服务于600+临床与研究机构，1000+客户和5000+重要科研项目，助力并联合发表300+篇CNS等国际学术期刊（不完全统计），在单细胞领域，烈冰助力用户发表单细胞文献30+篇，总IF＞300+，IF＞10+以上文章占比65%以上，包含Immunity、Nature Cell Biology、Nature Plants 、Advanced Science等生物领域国际主流学术期刊，已发表文章研究领域涵盖包括COVID-19研究、疾病发生转移机制，免疫研究、脑神经、白血病、胚胎发育、糖尿病、退行性疾病和植物领域研究等。成都单细胞服务机构BD单细胞测序平台同时兼容单细胞蛋白组测序（Ab-seq）和免疫组库测序等工作。

针对单细胞测序的细胞上样数，为什么不建议捕获到的细胞数量越高越好？一味地追求高数量的细胞捕获可能会存在一些问题。例如在上机细胞悬液浓度固定时，如果目标细胞捕获数增加到8000甚至10000，上样细胞悬液体积势必增加，在细胞悬液质量不是很理想（细胞活性<90%、碎片率>5%、结团率均>5%）的情况下，引入的背景信号会增加，分析结果不理想的直接体现包括：cell、non-cell无法有效区分和Fraction reads in cells偏低。当cell和non-cell无法有效区分时，会使得数据出现假阳性和假阴性结果！当目标细胞捕获数很大时，多细胞率会增加，数据分析时，此部分“cell”表现为基因检测数和UMI检测数是正常cell的N倍（N是一个GEM包裹的细胞数），导致所有细胞的统计数据（单个细胞基因检测中位数、单个细胞UMI检测中位数）虚高。此部分“cell”虽然可以通过设置数据分析阈值进行过滤，但是容易会有此类数据的残留和正常高基因检测细胞的人为去除！

对于稀有样本，或细胞量比较少的稀有组织，样本中每一粒细胞都很珍贵，BD Rhapsody单细胞捕获平台对该种类型的样本能实现友好包容，如果在实际实验中，我们发现因为样本类型和制备单细胞悬液方法的不同，容易出现单细胞悬液中死亡细胞的比例较高的情况。也会和您探讨是否考虑去除单细胞悬液中的死细胞和其他污染物的操作，以获得高质量数据是至关重要的。这是因为，死亡的细胞易裂解导致其中的RNA释放出来。这种cell-free RNA会导致检测的背景噪声，并会影响单细胞数据的质量。因此当样本活性较差时，对细胞悬液中细胞活性检测后，需要进行一般死细胞去除的工作（一般悬液活性小于70%时考虑此操作），以保证较高的上机捕获细胞的质量。BD Rhapsody平台在细胞捕获过程中没有偏好性，可同样无差别捕获中性粒细胞。

单细胞获得困难，不同组织要求不尽相同难以搞定？ 烈冰2000+项目消化经验，100+组织类型解离protocol，精心设计不同组织实验的解离、细胞悬浮实验体系，确保单细胞的获得。 冻存样本无法实验，珍贵样本无法使用？ 烈冰采用国际认可的冻存组织复苏技术以及死细胞过滤技术，确保冻存组织使用。 珍贵样本，细胞数量太少，消化背景杂无法做单细胞？ 采用国际认可的10X Genomics，BD Rhapsody双平台模式，根据样本实际情况和用户需求提供客观有效的实验方案,细胞量少，背景杂也能做单细胞。 单细胞RNA分类精度不足，部分细胞无法细分？ 烈冰同时采用单细胞蛋白质组与单细胞转录组测序技术，真正做到从上游到下游的全流程检测，确保超高的细胞分类精度。搭配BD FACSMelody流式分选仪，全线搭建BD Rahpsody单细胞测序平台。济南scRNA单细胞测序服务公司

烈冰一站式单细胞测序服务：立足科学研究，解码生命本质。广州BD VDJ单细胞实验服务

烈冰生物单细胞测序服务体系，不仅提供10X Genomics和BD Rhapsody两大国际认可的单细胞实验平台，在“附加”产品上，我们提供BD FACS Melody流式细胞仪，满足您对特殊细胞类型的富集需求，自主研发的Panocell单细胞捕获芯片，可兼容BD 平台全套原装磁珠、试剂和protocol,为您提供完整的单细胞多组学解决方案。从细胞多样本分析和染色所需的试剂到检测试剂盒，生物信息分析工具，和在线大数据分析系统、精简方案和专业团队技术支持，烈冰生物可为您提供用于单细胞多组学甚至到空间转录组测序的各种工具，助您加速科研探索之旅。广州BD VDJ单细胞实验服务

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