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蛋白被泛素化后（即蛋白上结合了泛素），意味着将要被运往蛋白酶体降解，一般用于降解细胞内老弱病残蛋白，再回收利用。同时也被用于排除异己，抵御外敌。该过程需要一系列酶介导：泛素***酶（E1）、泛素偶联酶（E2）和泛素E3连接酶（E3）。其中E3是起特异性识别作用的，即决定谁该被降解，不能把好同志降解掉。所以E3基因很多，植物中主要有四种类型：HECT、RING、U-box和CRLs。其中CRLs是植物中含量**丰富的E3连接酶。本研究中，通过酵母双杂交筛选到的标题蛋白MdBT2，整好是CRLs亚家族之一。因此作者推测MdBT2可能在与ApNMV1a结合后，起到了促进其泛素化和降解的作用。2酵母展示质量技术酵母展示技术,共收录30多个行业,涵盖多行业资料一键下载。海南宣传酵母文库

利用酵母文库进行双杂交筛选，结果显示 MdBT2 可以与 MdRGL3a 结合。MdRGL3a 编码 GA 信号阻遏物 DELLA 蛋白，主要分布于细胞核中。MdRGL3a 对于 GA 处理非常敏感，可以引起其发生降解，PAC 处理可以提高其稳定性。进一步的酵母一对一杂交验证实验表明，两者的结合依赖于 MdBT2 的 BTB 和 BACK 结构域、MdRGL3a 的 LHRI 和 SAW motif（图 A-B）。并通过 GST pull-down、BiFC 实验也证实了 MdBT2与 MdRGL3a 的结合（图 C-D）。细胞外降解实验显示，与对照相比，MdRGL3a 与过表达 MdBT2 的愈伤组织的总蛋白共同孵育，会导致 MdRGL3a 的降解加快；而与抑制 MdBT2 表达的愈伤组织的总蛋白共同孵育，会导致 MdRGL3a 的降解减缓（图 A）。并且蛋白酶体抑制剂 MG132 可以***抑制 MdRGL3a 的降解（图 B）。改变 MdRGL3a 表达量并不影响 MdBT2 的降解。以上结果表明，MdRGL3a 可能通过 26S 蛋白酶体途径发生降解，而 MdBT2 可以抑制 MdRGL3a 的降解。浙江生物技术酵母文库报价酵母双杂交原理 酵母双杂...。

酵母双杂交表明拟南芥AtBT2蛋白可以与AtRGA互作。与对照相比，拟南芥bt1/2双突变体幼苗高度降低，而硝酸盐处理可以进一步抑制其生长，外源施加GA可以回复其生长缺陷。在拟南芥中异源表达MdBT2可以明显提高植株高度，而PAC处理则会抑制这种生长的促进作用。在拟南芥中异源表达MdRGL3a可以明显抑制植株生长，而硝酸盐处理和MdBT2过表达则会缓解这种生长抑制作用。外源GA处理可以逆转以上对植株生长的影响（图A-D）。以上结果表明，BT蛋白通过DELLA蛋白调控植株生长，这一机制在不同的植物中具有保守性。

酵母文库实验：本研究发现了一个硝酸盐响应的 BTB/TAZ 蛋白 MdBT2，它参与调节硝酸盐介导的苹果植株生长。利用酵母双杂交、蛋白质 pull-down、BiFC 实验证实，MdBT2 可以与一个 DELLA 蛋白 MdRGL3a 互作，这种互作是 MdRGL3a 蛋白经由 26S 蛋白酶体途径的泛素化及降解所必需的。此外，异源表达 MdBT2 部分回复了 MdRGL3a 过表达所导致的拟南芥生长抑制。综上表明，MdBT2 可以通过降低 DELLA 蛋白 MdRGL3a 的丰度促进硝酸盐介导的植物生长。实验室培养显示，培养 45 天，苹果幼苗的高度和生物量随硝酸盐浓度的增加而增加（图 A-C）。百种酵母文库,让您的科研不再困难!！

酵母单杂交筛选：（4）在筛选到的转录因子中，***GL1促进HIV-2转录。***GL1在免疫细胞中***表达，并与HIV的其他转录***因子，即Sp1、AP-1和PCAF/CBP/P300存在相互作用，本研究中显示HEK293T细胞中，***GL1过表达后，与LTR连接的萤火素酶表达上升近2倍，说明***GL1是一个转录***因子。值得一提的是，文章的背景介绍内容中，对应用其他技术（如RNAi、scRNA-seq、CRISPR等）对HIV转录调控方向的已有成果分析，发现这些方法为HIV-1的复制和潜伏期提供了见解，但并没有直接评估转录因子的结合和功能。文章中也对酵母单杂交技术与其他互作组技术（如Chip-seq、motif预测）进行了比较分析，发现eY1H技术对已识别因子的验证率为30-60%，同等或优于其他技术。10年酵母双杂交建库筛库经验结合SMART和GATEWAY建库技术优势。浙江生物技术酵母文库报价

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