合肥高通量测序空间转录组技术支持

时间:2022年08月19日 来源:

10XVisium的实验主要分为两部分:组织学板块和组学板块。组织学板块包括样品的包埋、切片、固定、染色及成像,记录切片的形态学信息;组学板块包括cDNA的合成、扩增、接头连接和测序,记录切片的转录本信息和空间位置信息。具体实验流程如下:A、切片制备和优化:取新鲜组织、冷冻、切片,并进行HE染色成像,优化确定切片是否覆盖靶向区域。B、切片固定和透化:将组织切片放置在含有与RNA结合捕获探针的载玻片上,并进行固定和透化,使细胞中的mRNA得到释放,并结合到相应的捕获探针上,从而获取基因表达信息。C、逆转和文库构建:以捕获的RNA为模板,进行cDNA合成,和测序文库制备。D、高通量上机测序:对制备好的测序文库,进行二代高通量短读长测序。E、数据可视化分析:结合HE结果,确定哪些基因有表达,表达量高低,以及这些基因的空间位置信息ATCG碱基的排列组合构成了测序的庞大世界。合肥高通量测序空间转录组技术支持

所谓的高通量测序技术,又名大规模平行测序,是将DNA(或者cDNA)随机片段化、加接头,制备测序文库,通过对文库中数以万计的克隆(colony)进行延伸反应,检测对应的信号并获取序列信息。与传统测序法相比,高通量测序技术在处理大规模样品时具有强大的优势,又快(两天)又多(数百万克隆),成为目前组学研究的主要技术。空间转录组测序是一个系统的工程,开展项目前您可能会先评估它提供的见解是否与您的研究问题相匹配,如果匹配,实验过程如何规划,实验平台如何选择,样本如何制备,数据如何分析等等,而在这一切开始之前,我们的服务就已经开始了,从销售到实验到专业技术支持,我们开通全线对接渠道,帮助您快速定位项目诉求,提供从实验设计到文章发表的全流程,我们始终是您贴心的科学合作伙伴。重庆烈冰科技空间转录组数据分析可视化空间转录组测序技术的迅速发展和应用推广,为从多维度揭示疾病进展提供了强有力的工具。

空间转录组技术流程:1、组织优化由于不同物种、组织来源的样本所需的比较好透化时间不尽相同,在正式开展空间转录组测序实验前,需要利用组织优化kit进行条件的摸索。组织优化芯片上包含8个捕获区域,每个区域均覆盖了荧光标记探针,可捕获mRNA形成带有荧光标签的cDNA,随即可通过荧光成像结果判定比较好透化时间及组织优化条件。2、空间转录组测序确定组织优化条件后,即可进行切片、H&E染色及成像、空间转录组文库构建及测序分析流程。

基于桥式PCR技术的簇生成可以将模版链迅速扩增成千上万倍,保证过程中足够的测序深度。测序时使用特殊标记的dNTP:1)碱基上通过敏感键修饰上不同的荧光基团,用于区分ATCG;2)3端使用叠氮基团封闭,保证一次循环只上一个dNTP。每一轮循环结束时,会通过高速荧光显微镜记录荧光图像,再通入试剂除去荧光基团和叠氮基团,开启下一循环。通过分析读取同一位点的荧光,实时获取模版链的碱基序列。由于过程中使用的化学反应并不可控,随着循环数的增大会出现不同步的情况,因此Illumina的读长只能限制在200bp左右。烈冰专精空间转录组测序领域。

相比于常规的测序手段,空间转录组测序有几个明显的优势:1.将转录组信息与空间信息对应,体现组织内部的异质性:每个区域独特的条形码使测序结果与空间位置形成一一对应关系。虽然暂时还无法精细到单细胞层面,但是这样的区域划分也已经足以展现出组织内部不同区域间的转录组差异。2.不影响对全组织进行分析:芯片上捕获的全转录组在同一个反应中完成测序,能有效降低多次重复实验中的误差。测序结果如果不按照条形码归类,则直接体现的是切片全组织的转录组情况,无需再做单独检测。3.为进一步的研究提供指导意见:常规的转录组测序,对后续实验的指导仍然停留在全组织层面。而空间转录组测序则可以标识出更有价值的研究区域,引导研究者将组织进一步细分。附加流式分选细胞表面Marker,对于较低分辨率的标志物也能有效鉴定,助力高要求测序项目。上海烈冰空间转录组数据分析

空间转录组测序数据分析,认准烈冰NovelBrain生物信息数据分析平台。合肥高通量测序空间转录组技术支持

已发表的关于空间转录组技术有Slide-seq,LCM-seq,seqFISH,MERFISH,Liversinglecellzonation,Geo-seqandTomo-seq。这些方法或是在细胞数量上限制较大,或是存在有效测序深度不足等问题。10xGenomics公司提供的Visium空间基因表达解决方案是目前一个高通量空间转录组的商业化解决方案。该解决方案可以轻松地将空间转录组学技术应用到组织切片和染色的标准方法中,从而研究空间分辨率下整个转录组mRNA的表达情况,同时在同一组织切片中获得组织学相关信息。合肥高通量测序空间转录组技术支持

上海烈冰生物医药科技有限公司专注技术创新和产品研发,发展规模团队不断壮大。公司目前拥有专业的技术员工,为员工提供广阔的发展平台与成长空间,为客户提供高质的产品服务,深受员工与客户好评。公司业务范围主要包括:单细胞测序,生物大数据云分析平台,空间转录组测序,单细胞多组学测序等。公司奉行顾客至上、质量为本的经营宗旨,深受客户好评。一直以来公司坚持以客户为中心、单细胞测序,生物大数据云分析平台,空间转录组测序,单细胞多组学测序市场为导向,重信誉,保质量,想客户之所想,急用户之所急,全力以赴满足客户的一切需要。

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