化学发光试剂特点
检测试剂盒的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性,酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性,又保留酶的活性。在测定时,受检标本(测定其中的抗体或抗原)与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体,也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后,底物被酶催化成为有色产物,产物的量与标本中受检物质的量直接相关,故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高,间接地放大了免疫反应的结果,使测定方法达到很高的敏感度。可用于测定抗原,也可用于测定抗体。然而,影响检测试剂盒试验结果的因素很多,故加强各个环节的质量保证才能充分发挥其方法学的优点。试剂盒特点:高效、灵敏、特异的抗体。化学发光试剂特点
试剂盒技术原理:(1).抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。(2).结合在固相载体表面a的抗原或抗体仍保持其免疫学活性。(3).酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性,又保留酶的活性。(4).受检标本与固相载体表面的抗原或抗体起反应。再加入酶标记的抗原或抗体,也通过反应而结合在固相载体上。(5).此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。(6).加入酶反应的底物后,底物被酶催化成为有色产物,产物的量与标本中受检物质的量直接相关,故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。化学发光试剂特点需要选择高灵敏度的试剂盒。
试剂盒因为抗原、抗体的反应在一种固相载体-聚苯乙烯微量滴定板的孔中进行,每参与一种试剂孵育后,可通过洗刷除掉剩余的游离反应物,然后保证试验结果的特异性与稳定性。使用双抗体夹心法测定标本水平。用纯化的抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次参与,再与HRP符号的抗体结合,构成抗体-抗原-酶标抗体复合物,通过完全洗刷后加底物TMB显色。试剂盒TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的效果下转化成的黄色。
试剂盒加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,悄悄晃动混匀。温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。配液:将30倍浓缩洗刷液用蒸馏水30倍稀释后备用。洗刷:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗刷液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。加酶:除空白孔外每孔参加酶标试剂50μl。温育:操作。洗刷:操作同5。显色:试剂盒每孔先参加显色剂A50μl,再参加显色剂B50μl,悄悄震荡混匀,37℃避光显色15分钟。停止:每孔加停止液50μl,停止反响(此刻蓝色立转黄色)。试剂盒在样品分析过程中的损失的程度。
在试剂盒中通常有三次加样步聚,即加标本,加酶联络物,加底物。冻住血清融解后,蛋白质局部浓缩,散布不均,应充分混匀宜轻缓,避免气泡,可上下倒置混和,不要在混匀器上强烈振动。制备血浆标本需借助于抗凝剂,而血清标本只需待血清天然凝聚、缩短后即可取得。试剂盒也可在板孔中参与稀释液,然后在微型轰动器上轰动1分钟以保证混和。通常说来,在5天内测定的血清标本可放置于4℃,超越一星期测定的需低温冰存。可用作试剂盒测定的标本十分较多,体液(如血清)、分泌物(唾液)和排泄物(如尿液、粪便)等均可作标本以测定其间某种抗体或抗原成份,试剂盒中本次试验不需用的有些应及时放回冰箱保存。在间接法试剂盒中可使本底加深。试剂盒应该保证实验结果的重复性。化学发光试剂特点
试剂盒中不同样本的稀释液不混用。化学发光试剂特点
试剂盒根据要检测样品的数量来确定的板条数。每个比对的样品和空白孔是做复孔,而样品的数量就可以自己视情况而定,不过能用复孔的仍是用复孔。将标本液体1:1稀释后倒入50微升的反应孔中。在反应孔中在参加50微升的待测样品,然后马上参加50微升的生物素标记抗体,盖上模板,轻轻摇晃使其混合均匀后,试剂盒在37摄氏度的恒温下等候1小时。将孔内液体甩去,加满洗刷液,震动约30秒后,在甩去洗刷的液体,用纸将水吸干。这姿态重复三次。再在没空参加80微升的亲和链酶素-HRP,同上混合均匀后,在37摄氏度的恒温环境下等候半小时。化学发光试剂特点
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