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缓冲溶液是许多生化反应、生产、实验过程中的重要溶液,对稳定溶液的酸碱度有重要的影响。本文以**常见的几种缓冲体系——磷酸盐缓冲溶液、硼酸盐缓冲溶液、三羟甲基氨基甲烷(简称Tris)-HCl缓冲溶液、羟乙基哌嗪乙磺酸(供注射用)(简称HEPES)缓冲溶液为例,介绍缓冲溶液的组成、缓冲原理及其在生物化学方面的应用。对于绝大多数生物制剂(如疫苗、抗体、ADC偶联药物、脂质体等)而言,实验操作、实际生产以及生物体内的生化反应等都需要在特定的pH值范围内才能正常有效地进行,从而得到准确的实验结论或发挥比较好的***效果。在这些反应过程中酸碱缓冲溶液经常发挥着非常重要的作用。如人体血浆中存在NaHCO3-H2CO3、蛋白质钠盐-蛋白质、氧合血红蛋白钾盐-氧合血红蛋白等缓冲对构成血浆的酸碱缓冲系统,以维持正常人血浆的pH值在7.35~7.45。若血浆pH值低于7.35或者高于7.45则分别会引起酸中毒和碱中毒,危及生命。国内AVT注射用HEPES已登记。四川备案登记号HEPES批量
这是维基百科对于生物缓冲液的定义和解释,在这里我们不做过多解释。生物缓冲液有很多种,这里我们只讲常见的几种,从它们的化学性质,注意事项,具体用途到**重要的,如何确定哪种缓冲液**适合你的实验。三羟甲基氨基甲烷Tris,CAS是77-86-1,它是应用*****的缓冲液,其溶液呈弱碱性,25℃下的pKa为8.06,pH缓冲范围:7.0-9.0,广泛应用于生物化学、分子生物学、涂料等领域。储存方法:Tris缓冲液容易吸收空气中的二氧化碳,储存时需要密封。三羟甲基氨基甲烷盐酸Tris-HCl,CAS是1185-53-1,是Tris的盐酸盐形式,其溶液呈酸性。上海高纯度HEPES使用注意事项艾伟拓注射用HEPES已登记。
HEPES缓冲溶液的制备方法:一.500ml1MHEPES,pH=7.0Stocksolution的制备将19.15ghepes溶解在400ml蒸馏水中,加入0.5~1M的NaOH水溶液,调整至至少所需的pH(HePeS的有效ph范围为6.8~8.2),然后用蒸馏水定容至500ml,在4保存。二.加入少量盐的HEPESBuffer***(500ml)用HEPES6.5g、NaCl8.0g、Na2HPO4.7H2O0.198g、0.5MNaOH水溶液调节pH,*后定容。.2HEPES缓冲盐溶液的制备将1.6gNaCl、0.074gKCl、0.027gNa2HPO4.2H2O、0.2g葡聚糖(glucanordextran)和1gHEPES溶解在90ml蒸馏水中,用0.5MNaOH调节至所需的pH值,再用蒸馏水定容至100ml即可。
储存方法:HEPES缓冲液在2-8℃下可保存1年。注意事项:HEPES缓冲液运输时需要加冰袋。但储存时避免冷冻,否则会有盐类物质析出。N-三(羟甲基)甲基甘氨酸Tricine,CAS是5704-04-1,是一种两性离子缓冲液,名字由Tris和glycine衍生而来,结构类似于Tris,但是高浓度具有比Tris更弱的抑制性,也是“Good”缓冲液之一,**初开发用于提供叶绿体反应的缓冲体系。Tricine的有效pH缓冲范围为7.4-8.8,pKa=8.1(25℃),常用做电泳缓冲液,以及用来重悬细胞沉淀。Tricine具有低负电荷和高离子强度的特性,非常适用于电泳分离1~100kDa的低分子量蛋白。基于萤火虫荧光素酶的ATP分析实验中,比较10种常见的缓冲液,Tricine(25mM)表现出比较好的检测效果。另外,在自由基诱导的膜损伤实验中,Tricine还是一种有效的羟自由基清除剂。作者:泰安格林化工链接:GMP条件下生产注射级HEPES!
使用注射级氨丁三醇缓冲剂的注意事项:1.Tris缓冲液的pH值受温度影响大,△pKa/℃=-0.031,例如:4℃时缓冲液的pH=8.4,则37℃时的pH=7.4,所以一定要在使用温度下进行配制,室温下配制的Tris-HCl缓冲液不能用于0℃~4℃。2.Tris缓冲液的pH值受溶液浓度影响较大,缓冲液稀释十倍,pH值的变化大于0.13.Tris在一定程度上与各种分子反应,包括RNA酶抑制剂,醛,酶,DNA以及常见金属如Cr3+,Fe3+,Ni2+,Co2+和Cu2+等,在有些系统中会起抑制作用,在配制过程中需考虑与其他组分之间的相互作用;4.Tris缓冲液易吸收空气中的CO2,配制的缓冲液要注意盖严密封;5.Tris缓冲液对某些pH电极发生一定的干扰作用,需使用与注射级氨丁三醇溶液具有兼容性的电极;6.Tris缓冲液不适用于二喹啉甲酸(BCA)测定;7.吸入,摄入,皮肤吸收注射级氨丁三醇可造成伤害,操作时需戴好手套和护目镜;8.作为蛋白缓冲液时,若后续工作需要质谱,则不适宜用注射级氨丁三醇,比较好换成其他质谱仪可耐受的缓冲液。国内AVT稳定供货注射级HEPES!黑龙江辅料HEPES药用采购
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HEPESBuffer(1M,7.5pH)PreparationandRecipeHEPESbufferisoneoftheGood'szwitterionicbufferwithapHrangeof6.8-8.2.ItiscommonlyusedincellculturemediumasitspHiswellmaintainedwithchangesincarbondioxideconcentration.ToprepareLofHEPESBuffer(1M,7.5pH):ChangethevalueinthetextboxabovetoscaletherecipevolumeTable1.RequiredcomponentsComponentAmountConcentrationHEPES(mw:238.30g/mol)238.3g1MPrepare800mLofdH2Oinasuitablecontainer.Add238.3gofHEPEStothesolution.AdjustsolutiontodesiredpHby10NNaOH.AdddH2Ountilvolumeis1L.于4摄氏度保存。四川备案登记号HEPES批量
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