青岛single cell 单细胞多组学

reads数、基因表达量及细胞数量判定过程中：以捕获5000个细胞、100G的测序量为标准，每个细胞的reads数大约在50k左右；每个细胞的基因中位数取决于样本的细胞类型，例如成熟的B，T，粒细胞数量较多的组织中，由于该类型细胞表达的基因数普遍较少，导致基因中位数下降。而某一疾病组织、或者体外培养的如干细胞等，他们的基因表达数较高，甚至可以超过1万，这就导致该类样本基因中位数非常高。因此，我们对细胞数量以及基因中位数确认时，需要考察实际组织的细胞组成。单细胞多组学测序主要包含细胞分离、文库构建、高通量测序和生物信息学分析等步骤。青岛single cell 单细胞多组学

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当蜂巢孔内同时落入细胞和磁珠后，接下去可以往BDCartridge板中加入细胞裂解液对细胞进行裂解，使细胞内的RNA与磁珠上的标签进行结合，完成每个细胞内RNA的捕获和标记。这时，再将捕获了RNA的磁珠进行回收，待所有质控结果确认通过后就可以进行后续的RNA反转录、cDNA第二链合成等实验操作。而BDCartridge板则需要再进行一次成像，获得磁珠收集后的扫描图，判断磁珠是否已经被有效收集。根据每一步的质控结果，烈冰科技（NovelBio）单细胞测序实验团队会根据单细胞分选的实验结果生成实验总结报告，判断每一步骤是否通过质控，并得到捕获的单细胞数量以及双细胞比例，对整个实验进行总结评估。若所有过程通过质控，实验样本即可进行下一步实验操作。

BD的技术不再采用利用微流控孔道射出细胞和射出的磁珠碰撞的过程，进行单细胞捕获的技术，转而采用CytoSeq特有的蜂窝板技术。该技术用20万+的微孔（该数量级远大于Input细胞数量），保证单孔中的单细胞捕获。同时避免了10X中存在的概率碰撞影响捕获效率的问题，采用微孔捕获相对会有更好的捕获效率（来自两家企业商业宣传资料比对），保证Input细胞的高效使用。对于Input细胞的量更少的情况，可以基于百万级别的细胞总量开始进行前期处理以及后期捕获操作。而在细胞捕获完成后，进行细胞裂解后，同样的也进行细胞中RNApolyA序列的抓取工作。单细胞多组学测序技术已应用于心肌再生领域。

随着单细胞转录组测序技术（scRNA-Seq）的蓬勃发展，其在在胚胎发育，肿瘤细胞异质性，免疫细胞转化等多方面屡建奇功，但是由于细胞形态的不同和单细胞制备中细胞敏感性的差异等因素影响，scRNA-Seq在数据分析时可能会出现细胞类型占比失真，个别细胞类型丢失等情况。为了克服单细胞测序技术的局限性，单细胞核转录组测序技术（snRNA-Seq）应运而生，snRNA-Seq可利用冻存组织直接制备单细胞核进行转录组测序，不仅克服了细胞形态差异致使的细胞捕获差异，还克服了单细胞测序必须使用新鲜样本的多个局限性。多组学技术结合了不同的生物数据集，如基因组学、转录组学和蛋白质组学。北京single cell RNA单细胞多组学

单细胞组学技术方法的不断 发展和改进, 为单细胞层级的多组学整合分析奠定了 基础。青岛single cell 单细胞多组学

SingleCellSequencing技术，即利用优化后的高通量测序技术（NGS，NextGenerationSequencing）分析每一个单个细胞的序列信息，从而更高分辨率地揭示细胞间的细胞差异以及其在微环境中的功能情况。那么问题来了，如何获得单个细胞？如果无法获得单个细胞这一切都是不成立的；如何获得大批量的单个细胞？单个组织细胞群体通常在百万级别以上，如果被检测的测序细胞数量过小精确度不足；如何低成本地获得大批量单个细胞？单细胞测序成本非常高，尤其是需要测2000~3000个以上的细胞的时候，如果单个细胞的分选成本也很高，技术根本无法普及。所以，正因为这些问题的存在使得高通量测序在单个细胞测序应用中的普及度一直不足，直到几个突破性技术的诞生。青岛single cell 单细胞多组学

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