转录组高通量测序

时间:2022年08月31日 来源:

台盼蓝染色原理:台盼蓝染色原理:台盼蓝不能透过活细胞正常完整的细胞膜,故活细胞不被染色。而死细胞的细胞膜透性增高,可使染料进入细胞内而使死细胞染成淡蓝色。

通过显微镜使用血球计数板质检得到质检结果:明场(细胞未染色):主要可以观察悬液背景质量(背景干净,无杂质碎片,无细胞团块);台盼蓝场(细胞与台盼蓝染色后):主要可以观察活性(主要为活细胞,未染色蓝色的为活细胞);通过台盼蓝场计算活率:90%>80%;细胞浓度:710cells/µl;等结果来看,血球计数板质检结果的展示可以看出所有指标均符合上机标准,属于高质量单细胞悬液。 RNA样品请用1.5 mL离心管装好并用封口膜封好,并安置于50 mL离心管内或其他类似容器里,并旋紧盖子。转录组高通量测序

RNA类高通量测序样品要求:对于需要进行 RNA 抽提的样品,请使用新鲜取样的实验材料,当场分成小块(动物样品厚度需小于0.5 cm,植物样品厚度需小于0.3 cm)后立即用液氮或干冰乙醇速冻,保存于-80°C 冰箱,埋于足量的干冰(根据经验,在秋冬季节,如果打包合适,5 公斤块状干冰可以维持 50 小时,而小块的干冰能更好的包裹样品,但需比块状干冰多加些)中用保温箱寄送。一般组织样品,送样量至少200 mg/样;如果样品属于孢子,送样量至少500 mg/样。上海市16s高通量测序产品10xGenomics Chromium X多通道+高捕获+10x的CellPlex多样本混样技术。

细胞质检时染料染色的原理:台盼蓝染色原理:台盼蓝不能透过活细胞正常完整的细胞膜,故活细胞不被染色。而死细胞的细胞膜透性增高,可使染料进入细胞内而使死细胞染成淡蓝色。AO/PI染色原理:吖啶橙(AO)是一种小分子染料,可以通过完整的细胞膜,嵌入所有细胞(活细胞和死细胞)的细胞核,呈现绿色荧光;碘化丙啶(PI)只能通过不完整的细胞膜,即死细胞的细胞膜,嵌入所有死细胞的细胞核,呈现红色荧光,通过标记出的绿色荧光和红色荧光就可以辨别出活细胞和死细胞,这种特异性染色的方法也可以排除无核细胞、杂质、碎片等的干扰。

生工CHIP-Seq,项目介绍:CHIP-SEQ 技术,即染色质免疫共沉淀与高通量测序相结合的技术。它是研究体内蛋白质与DNA 相互作用的有力工具,还可以用来研究转录因子与基因表达的关系。通过高通量测序,可以一次性得到目的蛋白在整个基因组上的结合分布,得到目的蛋白精确的结合位点以及结合基序等信息。ChIP-Seq 的原理:首先通过染色质免疫共沉淀技术(ChIP)特异性地富集目的蛋白结合的DNA 的所属片段,并对其进行纯化与文库构建;然后对富集得到的DNA的片段进行高通量测序,将获得的数百万条序列标签精确定位到基因组上,从而获得全基因组范围内与组蛋白、转录因子等互作的DNA 区段信息。什么是KBSeq全质粒测序?

生工靶向捕获测序,项目介绍:利用序列捕获技术将基因组特定区域DNA捕捉并富集后进行高通量测序的基因组分析方法。全外显子测序即通过对某一基因组中的所有外显子进行测序从而获得所有外显子区域内的突变信息。由于该技术在临床上的潜力,被《科学》杂志评为2010年科学进展之一。外显子组测序可用于寻找单基因疾病、复杂疾病(如糖尿病、肥胖症等代谢综合症)、甚至是cancer的致病基因或易感基因。生工生物采用Aglient SureSelect系列外显子捕获系统,可以高效富集人全外显子区域,并结合Illumina XTen测序平台进行深度测序。后期可以完成SNP/InDel/CNV等变异检测,形成完整的分析报告。组织材料样品(提取RNA用)建议将标签用胶带贴到管壁,干冰运输。上海地区lncRNA高通量测序服务

ChIP项目至少要求50ng DNA,以Qubit 2.0检测为准。其余具体咨询生工高通量测序部。转录组高通量测序

全基因组测序是对未知基因组序列的物种进行个体的基因组测序,其研究主要包括3个方面:第一种为不参考任何现有序列从头组装测序,是对未知基因组序列的物种进行基因组测序,并综合利用不同测序技术和生物信息学工具对研究物种进行序列拼接和修正,进而获得该物种的基因组序列图谱;第二种为常见的全基因组重测序,是对已知基因组序列的物种进行个体或群体的测序研究,建立一个测序文库进行单个个体或不同个体混合池测序,发现遗传变异标记,进行后续的研究;第三种是在已有参考基因组序列图谱的基础上,对不同品种的具有代表性个体建立多个文库进行全基因组从头组装测序,此方法能够进一步的进行参考基因组的修补和发现短序列比对难以发现的遗传变异。生工生物拥有众多生物信息分析人才,可进行专业的项目分析,为客户提供个性化服务。转录组高通量测序

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