上海BD空间转录组测序价格

10XVisium的实验主要分为两部分：组织学板块和组学板块。组织学板块包括样品的包埋、切片、固定、染色及成像，记录切片的形态学信息；组学板块包括cDNA的合成、扩增、接头连接和测序，记录切片的转录本信息和空间位置信息。具体实验流程如下：A、切片制备和优化：取新鲜组织、冷冻、切片，并进行HE染色成像，优化确定切片是否覆盖靶向区域。B、切片固定和透化：将组织切片放置在含有与RNA结合捕获探针的载玻片上，并进行固定和透化，使细胞中的mRNA得到释放，并结合到相应的捕获探针上，从而获取基因表达信息。C、逆转和文库构建：以捕获的RNA为模板，进行cDNA合成，和测序文库制备。D、高通量上机测序：对制备好的测序文库，进行二代高通量短读长测序。E、数据可视化分析：结合HE结果，确定哪些基因有表达，表达量高低，以及这些基因的空间位置信息自主研发PanoCell单细胞实验测序平台。上海BD空间转录组测序价格

基于桥式PCR技术的簇生成可以将模版链迅速扩增成千上万倍，保证过程中足够的测序深度。测序时使用特殊标记的dNTP：1）碱基上通过敏感键修饰上不同的荧光基团，用于区分ATCG；2）3端使用叠氮基团封闭，保证一次循环只上一个dNTP。每一轮循环结束时，会通过高速荧光显微镜记录荧光图像，再通入试剂除去荧光基团和叠氮基团，开启下一循环。通过分析读取同一位点的荧光，实时获取模版链的碱基序列。由于过程中使用的化学反应并不可控，随着循环数的增大会出现不同步的情况，因此Illumina的读长只能限制在200bp左右。烈冰生物空间转录组多组学测序烈冰引进国际主流空间转录组测序平台，提供保留组织内部精细区域的空间信息的转录组测序。

10xGenomics空间转录组用于文库构建的每张载玻片上有四个捕获区域，每个捕获区域的大小为6.5x6.5mm，包含5000个被条形码标记的点（barcodedspots），每个点的直径为55μm，点和点之间中心的距离为100μm，并且每个点都有一个barcode序列。组织切片的细胞中会释放出mRNA，迁移到每个spot的mRNA会被标记上相应的barcode序列，然后进行文库构建并进行测序。根据数据的条形码信息对数据进行分析，以确定哪些数据来自哪个位置，从而实现空间基因表达的可视化。

作为2019年的明星技术之一，10x Genomics单细胞测序凭借其高通量、低成本、易操作、稳定性高等优势一直保持着高热度，目前利用该平台发表的文章已达500多篇。空间转录组技术优势：实现基因表达数据与空间定位信息的结合，解析多种类型组织切片样本中基因表达谱；无需组织解离，保留组织结构及细胞微环境，鉴定异质性组织中细胞类型，避免相关偏好性；可用于挖掘新的组织生物标记物；可与现行实验室组织分析方法轻松对接，短时间内即可完成切片及文库制备流程。深度的空间转录组测序数据解读助力生物健康医疗时代。

冰冻切片的空间转录组测序在RNA捕获、文库构建方面，需要将组织切片贴合在带有mRNA结合捕获探针的载玻片上，通过甲醛固定、H&E染色得到组织切片的形态结构。再进行透化处理，使细胞中的mRNA释放，并结合到芯片相邻的捕获探针上。将捕获的mRNA反转录合成cDNA并构建测序文库进行上机测序，从而获取基因表达信息。总体来说，空间转录组的实验流程包括：组织冻存-OCT包埋-冷冻切片-固定染色-组织透化-cDNA合成及建库-上机测序，而需要客户进行样本准备的步骤相对简单：组织冻存与OCT包埋。烈冰科技成立10余年，为科研学者提供专注的测序数据分析服务。西安上海烈冰生物空间转录组服务机构

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在发育过程或疾病发生过程中，组织内部的不同细胞经历了复杂的生物学过程，因此，组织内部的异质性研究是目前揭示重要生物学研究的一个重要研究手段。组织内部的异质性包括细胞类型的异质性和空间位置的异质性两个层面，细胞类型异质性可由单细胞测序来完美呈现，而空间位置的异质性，则需要可高通量地检测全转录组空间信息的新型研究方法来解决。烈冰生物真正实现空间转录组测序的全程把控，做到从实验设计、空间信息标记、建库测序、定制化分析的全流程一站式服务，助力高分文章发表。上海BD空间转录组测序价格

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