河南作用dMMR抗体检测试剂共同合作

    5MSI在结直肠ai诊断及预后中的应用MSI在林奇综合征中筛查诊断中的应用由于如Amsterdam标准、Bethesda标准等鉴定标准对林奇综合征诊断缺乏稳定性和敏感性[9]，目前公认的**准确、可靠地诊断林奇综合征的方法是MMR基因测序。又因MMR基因测序的费用昂贵，因此在进行基因测序前先进行初步筛查。目前较为公认的林奇综合征相关的初步筛查检测包括聚合酶链反应（PCR）和免疫组化（IHC）。当样本确定为MSS时，患者不可能患林奇综合征；当样本确定为MSI-L时，绝大部分患者不可能患林奇综合征；当样本确定为MSI-H时，患者患有林奇综合征的可能性极高，需进一步进行林奇综合征的筛查诊断。聚合酶链反应（PCR）：PCR的结果判读本文不做讨论。IHC检测注意事项：（1）可能会出现MMR蛋白在liu细胞核着色不完整或着色极微弱（并伴随细胞质着色）现象，有文献指出该现象可能是MMR基因突变（如错义突变）或MMR蛋白特点（该现象常见于MSH6蛋白）而造成的，建议进行PCR检测。（2）大约有ai患者其IHC检测MLH1蛋白表达缺失。这种缺失同遗传性无关，是MLH1启动子双等位基因的异常甲基化而造成的，为避免误诊，需加做BRAFV600E突变检测。若检测结果为阳性，可排除Lynch综合征[10]。。迈杰转化医学具备从样本制备到H&E，IHC、FISH、RNAscope及多重免疫组化等全套组织病理和分子病理检测能力。河南作用dMMR抗体检测试剂共同合作

    除非整个家族的结直肠ai发病率明显上升，否则很难发现单个个体携带者。因此，从MSI-H结直肠ai中筛选出可疑的Lynch综合征患者，不*有利于患者本人的liu***和预防筛查策略的制定，而且有利于发现Lynch综合征家系，为患者家族成员的liu预防提供重要信息。与以往以家系调查和临床信息为主导的筛查方法比，采用分子检测等辅助手段对本病进行筛查不*准确且更高效和可行。研究表明，如果严格按照修订的Bethesda指南进行MSI检测，将遗漏％的MSI结直肠ai和％的Lynch综合征。因此，E***P工作组(EvaluationofGenomicApplicationsinPracticeandPreventionWorkingGroup)推荐对所有(或<70岁)的新诊断所有(或<70岁)的新诊断结直肠ai结直肠ai进行MSI检测(图4)。五、小结与展望MSI结直肠ai占结直肠ai的15％，因其具有独特的发生机制、预后、***方案以及与Lynch综合征的密切关系而日益得到重视。目前，国际上很多大型医院和liu***中心均已开始采取对所有新诊断的结直肠ai进行MSI和／或免疫组织化学检测的策略，有的机构甚至开始对所有新诊断的子宫内膜ai也进行***检测。我国结直肠发病率持续上升，但对MSIliu和Lynch综合征进行筛查的观念尚待普及。分子机制的研究进展和检测手段的进步。河南作用dMMR抗体检测试剂共同合作迈杰转化医学已基于客户需求建立了完整的病理学检测平台，可提供一站式病理学解决方案。

    使得微卫星序列长度或碱基组成发生改变。MSI-H的患者为dMMR，MSI-L和MSS的患者为pMMR。目前推荐用于检测微卫星不稳定的5个常用位点分别为BAT-25、BAT-26、D2S123、D5S346和D17S250，2个位点不稳定则称为微卫星高度不稳定（MSI-H）；l个位点不稳定称为微卫星低度不稳定（MSI-L）；0个位点不稳定则称为微卫星稳定（MSS）。微卫星状态与结肠ai临床分期密切相关，在II期结直肠ai中，MSI-H/dMMR患者约占20%左右，在III期结直肠ai中约占12%，而在IV期中**少，约4%左右。1.微卫星状态在结肠ai中的预后作用从2000年Gryfe等发现Ⅰ~Ⅳ期的MSI-H结直肠ai患者对比MSS患者均具有***的生存优势开始，此后人们进行了一系列MS状态与结肠ai预后的相关研究，多数研究结果提示MSI对结肠ai的预后作用与临床分期密切相关。在II期结肠ai中，MSI-H/dMMR是预后良好的标志已被绝大多数研究所证实，基本达成共识；而对于III期结肠ai的预后价值尚存在争议；对于IV期结肠ai，由于MSI-H例数过少，因此相关结果不能说明其是否具有预后价值。MS状态对结肠ai的预后作用，不*与临床分期相关，还与**原发部位相关。N0147研究结果显示在III期结肠ai中，近端结肠（盲肠、升结肠、横结肠）。

    免疫组织化学的方法具有方便、快捷、稳定等优点并且对Lynch综合征的确诊具有指向性，因此被***接收，目前已几乎替代前者。上述MSI的传统检测方法不能用于对Lynch综合征的确诊，而免疫组织化学方法因直接检测相关蛋白对Lynch综合征具有***的指向性。为了提高对Lynch综合征的指向性，有学者建议将EpCAM列入错配修复蛋白检测行列。然而对Lynch综合征的确诊必需依赖于对MLH1、MSH2、MSH6、PMS2以及EpCAM基因进行突变或缺失的检查结果。四、错配修复蛋白染色错配修复蛋白染色结果判断应注意以下几点:1）着色部位是否为核；2）内对照（上皮细胞：正常肠上皮特别是腺体基底部细胞；间质细胞：淋巴细胞、平滑肌细胞、血管内皮细胞等）是否阳性；3）**细胞的细胞核是否为阳性（通常任何**细胞表达即判断为该错配修复蛋白阳性）错配修复蛋白结果解读:一种或多种错配修复蛋白表达缺失提示为MSI-H**。通常MLH1功能缺陷会合并PMS2表达缺失，而MSH2缺陷则常合并MSH6表达缺失，反之不然。迈杰转化医学蛋白免疫产品开发平台可提供基于IHC平台的体外诊断试剂盒以及蛋白抗体原料一站式开发服务。

    MMR）突变而易患结直肠ai和其他恶性liu的一种常染色体显性遗传性疾病，占结直肠ai的2%~5%。该综合征曾被命名为遗传性非腺瘤性结直肠ai（HNPCC），后因该命忽略了肠外liu的高发率而弃用。已知MLH1、MSH2、MSH6和PMS2这四种MMR基因与林奇综合征的发生密切相关。大多数林奇综合征家（85%~90%）检测到的是MLH1和MSH2突变，剩余的10%~15%的家族存在MSH6的突变，少数存在PMS2的突变[7]。同时，已有研究表明：绝大多数林奇综合征都具有高水平微卫星不稳定性（MSI-H）的现象[8]。林奇综合征发病年龄较早，平均年龄为45岁，明显低于正常人群发生结直肠ai的平均年龄（60岁）。林奇综合征患者的结肠ai好发于近端结肠，70%～85%的liu位于结肠脾区附近。这些liu具有特异的组织病理学特征，比如髓样生长的ai、粘液腺ai或liu区过多的淋巴细胞浸润。林奇综合征患者在其一生中易发生多处原发liu，据统计有54%～61%的林奇综合征患者会发生第二种原发liu，更有甚者，部分患者会发生三种或更多的原发liu[7]。这些liu包括有子宫内膜ai、胃ai、卵巢ai、尿路liu、肝胆liu、胰腺ai等。因此，当确诊的林奇综合征患者在发现***处结直肠ai时就会被建议进行更大的结肠次全切除术或全切术。迈杰转化医学具体包括全套的Leica组织样本制备系统，Ventana、Leica、DAKO等全自动免疫组化仪。河南作用dMMR抗体检测试剂共同合作

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    发明人还提供上述任一所述的抗msh6蛋白单克隆抗体，在msh6蛋白免疫检测中的用途。进一步地，所述免疫检测包括免疫组织化学法，免疫印迹法和酶联免疫法。区别于现有技术，上述技术方案依据msh6蛋白、抗原性、组成氨基酸的亲疏水性以及二级结构，选择msh6蛋白第1-100位氨基酸序列与gst蛋白融合表达,其dna编码序列为seqid**,用大肠杆菌进行表达，得到免疫原。对小鼠进行免疫，经细胞融合、筛选和亚克隆，获得高效分泌抗msh6蛋白单克隆抗体的单克隆细胞系abm58060-20a2-pu,以及由该细胞系所分泌的抗msh6蛋白单克隆抗体。本方案得到的抗体具有高特异性、敏感性，可以特异性识别表达msh6蛋白的细胞，适用于免疫学检测，特别是免疫组化检测。化染色结果图(左为abm58060-20a2-pu分泌的msh6，右为市售msh6)。具体实施方式实施例1重组msh6蛋白片段的制备一、抗原片段选择依据uniprot中登录号为p52701的蛋白质序列进行序列和二级结构分析，全长为1360个氨基酸长度的msh6蛋白含有muts超家族区域，其分子量约为152kda左右，依据通过在线服务器测的蛋白的二级结构(secondarystructure)和表面可及性(surfaceaccessibility)参数，并通过对其抗原性指数(jamesonba,:(1):181-6.)的分析结果。河南作用dMMR抗体检测试剂共同合作