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    图7IHC检测FGF-19过表达（左：正常胆囊组织(阳性对照)；右：肝细胞*组织(弱阳性)）➤➤方案4：RNAscope法评估FGFR1/2/3/4的mRNA表达水平此外，RNAscope在细胞原位评估mRNAs水平方面，能够更直接精细地确定基因的扩增状况。迈杰转化医学在数字病理平台上已经建立了检测FGFR过表达的RNAscope的方法，可以原位检测FGFR1-4mRNAs表达水平，为FGFR抑制剂的生物标志物检测和研究提供了更多可能（图8）。图8RNAscope检测肺*总FGFR1/2/3/4的mRNA表达水平除以上示范，迈杰转化医学还可提供其他类型（如PD/PK生物标志物）解决方案并已有相关经验（表7）。References:[1]HelstenT,ElkinS,ArthurE,[J].ClinicalCancerResearchAnOfficialJournaloftheAmericanAssociationforCancerResearch,2016,22(1):259.[2]TurnerN,.[J].NatureReviewsCancer,2010,10(2):116-129.[3]PetersKG,MarieJ,WilsonE,[J].Nature,1992,358(6388):678-681.[4]KangS,ElfS,DongS,.[J].MolecularandCellularBiology,2009,29(8):2105-2117.[5]BabinaIS,[J].NatureReviewsCancer,2017,17(5):318.[6]NataliaPorębska,Marta,.[J].JournalofClinicalMedicine。 迈杰转化医学针对药物研发过程中靶点、适应症及PD研究中生物标志物等研究的进行方案开发设计。上海定制迈杰转化医学NGS平台共同合作

    降低引物的扩增效率，也需要重新设计并合成引物。3、初次复合扩增时，各个引物在反应体系中的浓度均为μm；之后对引物浓度进行调整，获得进行pcr扩增时各个引物的**佳浓度。经过上述步骤，获得引物组合。引物组合由120条引物组成，用于检测68个基因座。各个基因座的名称、扩增基因座对应的引物名称和引物的核苷酸序列依次见表1中第1列、第2列和第3列。进行pcr扩增时各个引物的**佳浓度见表1中第5列。表1各个基因座对应的引物在hg38人类参考基因组(hg38人类基因组的信息见网址./goldenpath/hg38/bigzips/)中的pcr扩增产物的长度和核苷酸序列详见表2。各个str基因座的pcr扩增产物的长度范围分布见图1。表2三、基于二代测序技术检测68个基因座的试剂盒的制备基于二代测序技术检测68个基因座的试剂盒包括引物混合物；引物混合物由步骤二制备的120条引物混合而成。实施例2、实施例1制备的试剂盒检测标准品2800m的str分型及其应用一、实施例1制备的试剂盒检测标准品2800m的str分型1、dna样本准备取标准品2800m，用超纯水稀释，获得浓度为1ng/μl的标准品2800m水溶液。2、pcr扩增以标准品2800m水溶液为模板，采用实施例1步骤三制备的引物混合物进行pcr扩增，得到pcr扩增产物。安徽专业迈杰转化医学NGS平台经验丰富迈杰转化医学具有多年伴随诊断服务经验,获得CNAS国际实验室认可,美国CAP认证。

    套峰细分的话有如下几种情形:全双峰：如样品为克隆后质粒，则质粒中含有多个引物结合位点；如样品为PCR产物，则含有非特异性扩增。前端双峰：如样品为克隆后质粒，则其含有多个引物结合位点，并且其中一套模板出现测序中断的现象；如样品为PCR产物，则PCR产物中含有多个引物结合位点，或者PCR产物中含有引物二聚体等小片段污染。中间双峰：如样品为克隆后质粒，则质粒并非单克隆；如样品为PCR产物，则部分产物中具有碱基缺失现象，或目的基因为等位基因导致PCR产物自身不纯。后端双峰：如样品为克隆后质粒，则质粒并非单克隆；如样品为PCR产物，则部分产物中具有碱基缺失现象。解决办法：针对二聚体及小片段干扰的情况，可以使用切胶回收的方法纯化PCR产物；针对含有多个引物结合位点的情况，应当更换测序引物；针对PCR产物出现碱基缺失的情况，可以使用克隆后测序以排除碱基缺失的产物；针对非单克隆的情况，应在确认克隆无误的前提下重新挑取单克隆进行测序；针对PCR产物含有非特异性扩增的情况，应优化PCR反应条件去除非特异性扩增，重新制备样品测序；针对等位基因具有双模板的情况，应当采用克隆测序以保证单次测序样品序列一致。

    测序成本的变化除了测序通量和读长的进步之外，测序技术的大范围应用**主要应该归功于成本的下降，在早期只有***代测序技术之时，人类基因组计划耗资30亿美元才获得了大部分的人类基因组信息，这样高昂的成本显然不是常规科学研究者能够承受的。基因测序技术成本变化新一代测序技术的发明和应用**降低了获取核酸序列所需的成本，其打破了摩尔定律的限制，使得获得基因序列所需的金钱出现了断崖式的下降，在2008年，全基因组测序的成本降至20万美元，到2010年，该费用已经可以控制在10000美元以内，目前，测定一个人类的全基因组只需要不到1000美元即可完成。测序技术的发展方向目前，基因测序技术已经在众多领域得到广泛应用，包括生物的基因组图谱绘制、环境基因组学和微生物多样性、转录水平动态响应及其调控机制，疾病相关基因的确定和诊断、表观遗传学和考古学、物种进化演替过程等等。就当前市场形势看来第二代短读长测序技术在全球测序市场上仍然占有着***的优势地位，但第三代测序技术的应用也已在近几年实验了快速发展。未来基因测序技术发展方向：更快的序列获取速度；更准确的碱基识别方式；更长的单条测序序列长度；更轻便的测序仪器平台；更简便的操作过程。 迈杰转化医学拥有3D HISTECH Pannoramic MIDI数字化病理扫描仪及91360远程病理系统。

    细胞鉴定：表面标志物鉴定（流式细胞术），分化能力鉴定（间充质干细胞成骨分化、间充质干细胞成脂分化、间充质干细胞成软骨分化），核型分析；细胞转染：慢病毒、腺相关病毒、腺病毒、质粒、microRNA、lncRNA等转染服务；免疫学分析：免疫细胞化学、免疫荧光、激光共聚焦、westernblot、Co-IP、ELISA等；分子技术：qPCR、PCR、***定量PCR等。关键词：人骨髓间充质干细胞、人脐带间充质干细胞、人脐带血间充质干细胞、人羊膜间充质干细胞、人胎盘间充质干细胞、人脂肪间充质干细胞、大鼠骨髓间充质干细胞、大鼠脂肪间充质干细胞、小鼠骨髓间充质干细胞、小鼠脂肪间充质干细胞、兔骨髓间充质干细胞、犬骨髓间充质干细胞、犬脂肪间充质干细胞、猪骨髓间充质干细胞、细胞培养、原代细胞弗元生物，中国自己的生物品牌。迈杰转化医学希望能和创新型药企共同探索创新生物标志物的临床应用潜力。安徽专业迈杰转化医学NGS平台经验丰富

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  上述任一所述复合扩增体系还可包括进行pcr扩增反应所需的试剂。所述“进行pcr扩增反应所需的试剂”不包括pcr扩增反应所需的引物。上述任一所述复合扩增体系可为20μl，由10μl2×mastermix、上述任一所述引物组合和模板组成。2×mastermix具体可为德国qiagen公司的产品。所述模板具体可为浓度为1ng/μl的标准品2800m的水溶液或样品的基因组dna。所述样品可为人口腔拭子。所述标准品2800m具体可为promega公司的产品，产品目录号为dd7251。含有上述任一所述引物组合的试剂盒也属于本发明的保护范围；所述试剂盒的用途可为(h1)-(h5)中的至少一种：(h1)str分型；(h2)y-str分型；(h3)个体识别；(h4)亲权鉴定；(h5)种族推断。本发明还保护上述任一所述复合扩增体系或上述任一所述试剂盒的制备方法；该制备方法包括将上述任一所述引物组合中的各条引物单独包装的步骤。本发明还保护上述任一所述引物组合或上述任一所述复合扩增体系在制备试剂盒中的应用；所述试剂盒的用途可为(h1)-(h5)中的至少一种：。 上海定制迈杰转化医学NGS平台共同合作