长沙BD单细胞实验平台

针对单细胞测序的细胞数量判断环节：主要是对细胞数量、基因表达量、测序质量进行整体描述。过滤标准：由于细胞破碎后游离RNA会释放到环境或孔中，并且测序中也会存在一些死细胞，导致数据存在background值。因此，我们需要设定一定的标准来过滤掉假细胞或死细胞。以10× Genomics为例，细胞数量判断主要通过分析UMI Counts-Barcode曲线斜率拐点，当存在多个斜率拐点的时候，结合预期UMI=500时的细胞数量进行过滤。当斜率拐点低于UMI=500的时候，选择UMI=500作为细胞的判断的标准；否则，选择和预期细胞数量接近的拐点作为细胞判断的位置。这样我们能够有效获得真实的并且在基因数量上可以分析的数据。测序的革新让科学研究从个体基因差异逐渐转为个体细胞的基因差异。长沙BD单细胞实验平台

根据烈冰多年单细胞测序服务经验，为什么不建议您一味的追求高细胞数量的捕获：单细胞测序所有的分析都是基于细胞聚类进行，而细胞聚类是在区分cell和non-cell后，获得细胞基因表达谱，通过降维（pca），无监督聚类以及可视化（t-SNE）得到的。进行细胞聚类时需要考虑到每个细胞的基因表达模式，因此即使是相同的数据，在剔除几个细胞的情况下，前后获得的聚类图也会出现明显不同。而当细胞捕获数过多时，无论是假阴性和假阳性数据还是多细胞数据，都会对正常细胞聚类产生影响，造成聚类结果失真。这也是很多文章，特别是很多高分文章，为什么单个样本捕获细胞数在2000-3000的原因了。烈冰建议单个样本捕获细胞数在3000-5000个时，数据量在100G左右时，可以满足分析和文章发表的多重需求。杭州single cell 单细胞测序服务自2019年起，烈冰生物BD单细胞测序平台已助力发表近20篇一区CNS高分文章。

单细胞测序庞大的数据烈冰生信团队倾情研发的NovelBrain®生信大数据分析平台，可实现零代码操作、简单方便：单细胞浏览器的操作简单，不需要命令行操作。简单拖拽、设置参数即可运行，即使生信0基础用户也可以运用自如；可视化展示海量结果文件：可视化展示Cluster的基因数，UMI数量、线粒体RNA占比信息；以及不同Cluster对应的细胞数量、基因表达量、RNA表达量、样本细胞分布、线粒体RNA表达量等；3D立体展示，文章动图先人一步：单细胞浏览器针对t-SNE图、UMAP图和pseudotime结果进行三维立体展示，更加直观立体的观察细胞分布和聚类情况。

针对单细胞测序的细胞上样数，为什么不建议捕获到的细胞数量越高越好？一味地追求高数量的细胞捕获可能会存在一些问题。例如在上机细胞悬液浓度固定时，如果目标细胞捕获数增加到8000甚至10000，上样细胞悬液体积势必增加，在细胞悬液质量不是很理想（细胞活性<90%、碎片率>5%、结团率均>5%）的情况下，引入的背景信号会增加，分析结果不理想的直接体现包括：cell、non-cell无法有效区分和Fraction reads in cells偏低。当cell和non-cell无法有效区分时，会使得数据出现假阳性和假阴性结果！当目标细胞捕获数很大时，多细胞率会增加，数据分析时，此部分“cell”表现为基因检测数和UMI检测数是正常cell的N倍（N是一个GEM包裹的细胞数），导致所有细胞的统计数据（单个细胞基因检测中位数、单个细胞UMI检测中位数）虚高。此部分“cell”虽然可以通过设置数据分析阈值进行过滤，但是容易会有此类数据的残留和正常高基因检测细胞的人为去除！单细胞多组学测序可识别重要的转录因子，进行谱系和发育追踪。

烈冰生物搭建近10台BD Rhapsody平台，目前为全国范围内的高校、医院和研究所等单位的科研学者提供服务，BD Rhapsody平台采用U型微孔板，1个板即对应1个样本（不混样的情况下），每个通道一般捕获细胞数在1000-10000个之间，而上限可捕获40000细胞时也能获得较低的双细胞率，此外，单个细胞捕获效率高达80%，可准确鉴别稀有细胞类型，有利于稀有样本或小细胞量类型样本研究；细胞可适性高，对细胞大小（直径超过40um细胞需要制备成细胞核）及类型无限制。细胞捕获周期较短，能够实现自动分离，且实验端捕获细胞过程全程可视化进行，保障每一例珍贵样本实验的成功进行，1天内可完成从细胞悬液到cDNA文库构建的所有的测序准备工作。BD单细胞测序平台同时兼容单细胞蛋白组测序（Ab-seq）和免疫组库测序等工作。温州BD单细胞多组学测序

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据不完全统计，截至2022年6月，烈冰生物助力发表单细胞文章近40篇，从平台应用比例来看，应用10X Genomics和BD Rhapsody两大平台发文比例各占50%左右，研究类型涵盖疾病发展，靶点探索，免疫研究，神经发育，干细胞分化，植物发育，退行病变，糖尿病，COVID-19等等研究；从发表期刊水平来看，烈冰生物联合发表的单细胞文章，CNS一区期刊占比在30%以上，其中包括immunity三篇，Nature子刊3篇（Nature cell biology,Nature Plants，Nature communication）,风湿类领域ARD期刊1篇，CUT 1篇，Advanced Science多篇，IF大于10分以上文章占比高达68.5%，烈冰专属单细胞测序服务团队，将与您携手谱写下一篇“高分”新文章。长沙BD单细胞实验平台

上海烈冰生物医药科技有限公司一直专注于生物科技、医药科技、信息科技、计算机科技领域内的技术开发、技术服务、技术转让、技术咨询，市场营销策划，市场信息咨询与调查（不得从事社会调查、社会调研、民意调查、民意测验），从事货物及技术的进出口业务，计算机、软件及耗材（除专控），软件开发【依法须经批准的项目，经相关部门批准后方可开展经营活动】，是一家医药健康的企业，拥有自己**的技术体系。目前我公司在职员工以90后为主，是一个有活力有能力有创新精神的团队。公司业务范围主要包括：单细胞测序，生物大数据云分析平台，空间转录组测序，单细胞多组学测序等。公司奉行顾客至上、质量为本的经营宗旨，深受客户好评。公司凭着雄厚的技术力量、饱满的工作态度、扎实的工作作风、良好的职业道德，树立了良好的单细胞测序，生物大数据云分析平台，空间转录组测序，单细胞多组学测序形象，赢得了社会各界的信任和认可。