苏州10X单细胞测序平台

时间:2022年07月30日 来源:

针对单细胞测序的细胞上样数,为什么不建议捕获到的细胞数量越高越好?一味地追求高数量的细胞捕获可能会存在一些问题。例如在上机细胞悬液浓度固定时,如果目标细胞捕获数增加到8000甚至10000,上样细胞悬液体积势必增加,在细胞悬液质量不是很理想(细胞活性5%、结团率均>5%)的情况下,引入的背景信号会增加,分析结果不理想的直接体现包括:cell、non-cell无法有效区分和Fractionreadsincells偏低。当cell和non-cell无法有效区分时,会使得数据出现假阳性和假阴性结果!当目标细胞捕获数很大时,多细胞率会增加,数据分析时,此部分“cell”表现为基因检测数和UMI检测数是正常cell的N倍(N是一个GEM包裹的细胞数),导致所有细胞的统计数据(单个细胞基因检测中位数、单个细胞UMI检测中位数)虚高。此部分“cell”虽然可以通过设置数据分析阈值进行过滤,但是容易会有此类数据的残留和正常高基因检测细胞的人为去除!强势发文!烈冰单细胞测序助力揭示愈伤组织能再生的机制。苏州10X单细胞测序平台

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FluidigmC1平台作为应用于单细胞测序(SingleCellRNASequencing)领域的商业化分选技术,基于富鲁达(Fluidigm®)的微流控技术,大约在几个小时中可以捕获96个左右的细胞,进行各类的Single-Cell测序建库。当然,通量还是比较小。但不可否认的是,现在很多非RNA类SingleCell测序,仍然在采用这样的技术,如SingleCellDNA-Seq,SingleCellATAC-Seq等,都是采用此技术进行单细胞分选后再分别用不同试剂盒建库。所以可以说,至少在10X和BD,或者其他企业推出有效的SingleDNA测序技术之前,C1仍然会是市场上的重要组成部分。

基于10XGeomics动态微流控技术,利用Tn5转座酶酶切开放染色质,形成短片段,单细胞ATAC测序在表观基因组学水平上,揭示单细胞染色质的可及性问题,区分细胞异质性,获得开放染色质的位置、转录因子的结合位点、核小体的调控区域和染色质状态等信息,是单细胞表观遗传学的重要突破:分析每个细胞数千个独特的染色质开放区域,识别细胞类型和细胞状态;识别重要的转录因子,进行谱系和发育追踪;探究驱动细胞类型和状态之间基因表达差异的非编码序列;探究细胞类型特异性和基因调控网络特征等。是当前重要的多组学研究基因表达和表观遗传学的手段。单细胞测序数据分析,认准烈冰NovelBrain生物信息数据分析平台。

现有的单细胞测序技术阵营在几个主要领域存在差别。一个是分隔单个细胞以在其中进行微反应的物理平台。在这个空间,单个细胞的内容物释放,转录本或其他生物分析物被标记或添加索引,以便下游识别。现有技术的另一个主要区别是如何添加索引,就像生成测序文库所涉及的流程步骤一样。10XGenomics单细胞测序平台采用动态微流控技(Drop-Seq具有类似的技术原理)。从横向孔道中逐一输入凝胶微珠,其中一列纵向孔道输入细胞,凝胶微珠与细胞碰撞后会吸附在凝胶微珠上,并通过微流控技术,将之输入到第二纵向孔道,即油相孔道中。这时候,就形成了一个个油滴并输出并收集在EP管中。每一个油滴中会落入一个细胞以及一个凝胶微珠,那么在每一个凝胶微珠中上长满了不同的CellBarcode和UMIBarcode连接形成的序列,再加上一端PolyT的抓手,构成我们的捕获凝胶微珠。而这个凝胶微珠抓手就会使用oligodT抓住mRNA构建文库。经验丰富的实验团队,为获得示组织内真实表达水平的高质量冷冻切片提供硬件和技术保障。重庆二代测序单细胞测序平台

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单细胞多组学带来的突破不但改进了实验过程,还帮助科学家在健康和疾病研究的关键领域取得新进展。那些过去从转录平均值或单项参数读取中无法获得的新发现正在改变我们对疾病的认识。从鉴定新的细胞类型和状态,到揭开疾病用药应答和耐药的潜在机制,单细胞测序正在推动突破性的研究,有望改变生物学和医疗。无论是无法解释的疾病,还是人体或自然界中尚未探索的系统,曾经模糊的东西正变得越来越清晰。随着我们迈向科学的未来,我们手头的工具就像伽利略的望远镜一样能够提高焦距和放大倍数,而定义科学未来的知识新深度是十年前的人们所无法想象的。苏州10X单细胞测序平台

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