海门哺乳动物细胞生长培养基
胎牛血清、新生牛血清、小牛血清区别三者之间的区别:1、采集血液时间不同,胎牛血清(FetalBovineSerum)是在母牛怀孕5-8个月时,通过胎牛心脏穿刺采集血液获取的血清。新生牛血清(NewbornCalfSerum)是来自刚出生~出生后2周内的新生牛静脉取血。小牛血清(CalfSerum)采自出生后2周至1年内的小牛静脉取血。2、组份与比例不同,两者所含的促细胞生长因子、促贴附因子、元素及其他活性物质等组份与比例不同。胎牛血清尤其含有胚胎发育所必需的生长因子。一些生长因子到胎牛10个月时就消失了。用途与用法不同,某些细胞必需胎牛血清才能生长,而有些细胞只需小牛血清即可。使用浓度一般在5%-10%,有特殊要求的浓度在20%。胎牛血清促细胞生长因子、促帖附因子、元素及其他活性物质等组分也不同于其他几类血清。海门哺乳动物细胞生长培养基
什么是优良的胎牛血清?外观,好的血清应是透明清亮,土黄色或棕黄色,无沉淀或极少沉淀,比较粘稠。如发现血清浑浊,不透明,含许多沉淀物,说明血清污染或血清中的蛋白质变性;若棕红色,说明血清中的血红蛋白含量太高,有溶血现象。总蛋白含量,胎牛血清一般范围是30-40mg/ml,数值偏高,说明采集血液的牛龄偏大,不是胎牛;数值偏低,表明血清可能掺水了。血红蛋白,标准为不高于20mg/dl,颜色越红,数值越高;反之,数值越低。pH,国产血清,大多高于7.5,进口胎牛血清,大多低于7.5,具体原因未知,可能和牛龄有关,这也能用来初步鉴别血清的来源。南京RPMI 1640培养基(无硝酸钙)胎牛血清可以起到缓解酸碱度的作用,目前这方面的作用已经得到了证实。
胎牛血清的保存方法:热灭活是指56℃,30分钟加热已完全解冻的血清。加热过程中须规则摇晃均匀.此热处理的目的是使血清中的补体成分灭活。除非必须,一般不建议作此热处理,因为热处理会造成血清沉淀物明显增多,而且还会影响血清的质量。补体参与反应有:细胞毒作用,平滑肌细胞收缩,肥大细胞和血小板释放组胺,增强吞噬作用,促进淋巴细胞和巨噬细胞发生化学趋化和活化。血清中的沉淀物絮状物:主要是血清中的脂蛋白变性及解冻后血清中纤维蛋白造成,这些絮状物不会影响血清本身的质量。可用离心3000rpm,5分钟去除,也可不用处理。显微镜下"小黑点":经过热处理过的血清,沉淀物的形成会明显增多。有些沉淀物在显微镜下观察象"小黑点",常误认为血清受污染。一般情况下,此小黑点不会影响细胞生长,但如果怀疑血清质量,则应立即停止使用,更换另一批号的血清。
胎牛血清(FoetalBovineSerum,简称FBS):是采自5-8个月胎龄牛胚胎中的胎血。此时胎牛各脏器正处生长分化阶段,血中含有丰富的生长发育因子,非常适合各种细胞的培养,一旦胚胎发育完全这些因子自动消失。因此8个月胎龄以上的牛胚胎,已接近足月,不能作为胎牛血清的原料来使用。有下列情况者,对血清内有害元素应格外留意筛选:1.养干细胞时,干细胞对内有害元素非常敏感,如果血清中内有害元素≥3EU/ml时,干细胞很容易死亡。很多使用者,在血清在试用前,就通过提早审核该批次《检测报告》,以决定是否入围进行试用。2.养免疫细胞时,过高的内有害元素可诱导免疫细胞释放炎症因子,抑制小鼠红细胞集落的形成等。3.基因敲除相关的细胞实验,培养的细胞要尽可能保持其原始状态,任何引导细胞衰老或凋亡的试剂,都会让后续的实验结果“失之毫厘,谬以千里”。在准备血清和其他试剂时,选择极低的内有害元素(更好≤1EU/ml),对实验至关重要。胎牛血清提供结合蛋白,能识别维生素、脂类、金属和其他元素等,能结合或调变它们所结合的物质活力。
胎牛血清的生产和质控也是影响产品品质的重要因素。胎牛血清生产流程可分为原料采集、原料加工及冷链运输三个重要环节。生产过程中的每一步,如血源采集、加工、过滤、辐照处理、包装、质检和物流等,都必须遵循行业高标准,以确保产品的优异品质。一个符合业内标准的血清生产流程是这样的:在严格规范的健康与检疫监控下,怀孕母牛从牧场运输到屠宰场,胎牛经心脏穿刺取血,得到胎牛血清原料;新生牛和小牛血清则取自出生相应天数的牛血液。按照国际标准,血清生产需经过多级预过滤和三级0.1μm精过滤,以去除包括支原体在内的各种微生物与杂质。生产后的血清需经过严苛的质检环节,得到合格成品后,保存和运输环节也要严格遵循相关要求。胎牛血清的免疫球蛋白含量要远远低于新生牛血清,胎牛的血清相对来说比较纯。常州DMEM 培养基(高糖,无酚红)
胎牛血清对促进细胞生长或抑制生长活性是达到生理平衡的。海门哺乳动物细胞生长培养基
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