苏州高通量测序空间转录组测序服务

时间:2022年08月30日 来源:

单细胞测序技术是一种在单细胞水平上对基因组、转录组、表观组等进行高通量测序分析的技术。单细胞测序技术能够在组学水平揭示细胞间的异质性。单细胞水平细胞谱系追踪技术位居2018年Science 杂志评选的科学突破。常规单细胞转录组测序技术丢失了细胞在原组织中至关重要的空间位置信息,而单细胞空间转录组技术在进行单细胞转录组测序的同时保留并记录了细胞的空间位置信息。空间转录组技术能够揭示细胞间的相互作用以及细胞所处的微环境,将成为发育生物学、神经生物学、免疫生物学等领域的研究利器。烈冰引进国际主流空间转录组测序平台,提供保留组织内部精细区域的空间信息的转录组测序。苏州高通量测序空间转录组测序服务

10XVisium的实验主要分为两部分:组织学板块和组学板块。组织学板块包括样品的包埋、切片、固定、染色及成像,记录切片的形态学信息;组学板块包括cDNA的合成、扩增、接头连接和测序,记录切片的转录本信息和空间位置信息。具体实验流程如下:A、切片制备和优化:取新鲜组织、冷冻、切片,并进行HE染色成像,优化确定切片是否覆盖靶向区域。B、切片固定和透化:将组织切片放置在含有与RNA结合捕获探针的载玻片上,并进行固定和透化,使细胞中的mRNA得到释放,并结合到相应的捕获探针上,从而获取基因表达信息。C、逆转和文库构建:以捕获的RNA为模板,进行cDNA合成,和测序文库制备。D、高通量上机测序:对制备好的测序文库,进行二代高通量短读长测序。E、数据可视化分析:结合HE结果,确定哪些基因有表达,表达量高低,以及这些基因的空间位置信息武汉烈冰科技空间转录组技术支持烈冰全线实验平台满足超深度、大规模发现和复杂疾病研究的测序。

空间转录组技术流程:1、组织优化由于不同物种、组织来源的样本所需的比较好透化时间不尽相同,在正式开展空间转录组测序实验前,需要利用组织优化kit进行条件的摸索。组织优化芯片上包含8个捕获区域,每个区域均覆盖了荧光标记探针,可捕获mRNA形成带有荧光标签的cDNA,随即可通过荧光成像结果判定比较好透化时间及组织优化条件。2、空间转录组测序确定组织优化条件后,即可进行切片、H&E染色及成像、空间转录组文库构建及测序分析流程。

作为2019年的明星技术之一,10x Genomics单细胞测序凭借其高通量、低成本、易操作、稳定性高等优势一直保持着高热度,目前利用该平台发表的文章已达500多篇。空间转录组技术优势:实现基因表达数据与空间定位信息的结合,解析多种类型组织切片样本中基因表达谱;无需组织解离,保留组织结构及细胞微环境,鉴定异质性组织中细胞类型,避免相关偏好性;可用于挖掘新的组织生物标记物;可与现行实验室组织分析方法轻松对接,短时间内即可完成切片及文库制备流程。空间转录组测序可识别重要的转录因子,进行谱系和发育追踪。

空间转录组测序的数据分析基本分为三个阶段:1.数据的预处理部分;2.Spot点阵的分群与定义;3.Spot分群的功能与生物学价值。每一个部分都不可或缺,其结果都对后续的分析结果有重要影响。由于空间转录组的序列结构与单细胞转录组测序的左端序列结构是非常接近的,都是Cellbarcode/SpotBarcode+UMI+捕获区域这样的设计。右端普遍为捕获的RNA序列。因此采用单细胞的原始数据过滤策略即可,左端可以考虑切下捕获区域前的序列区域作为后续分析用的序列以减少分析负荷。随后,采用10X官方的Spatialranger的策略进行后续分析,解析出位于空间位置中的有效的Spot表达矩阵。十二年测序经验,烈冰生物空间转录组领域的佼佼者。西安上海烈冰生物空间转录组测序服务公司

强势发文!烈冰空间转录组测序助力揭示愈伤组织能再生的机制。苏州高通量测序空间转录组测序服务

单细胞测序是指针对单个细胞进行全转录组测序分析,可精确地描述每一个细胞的状态,在异质性发育过程中具有不可忽视的应用价值。然而,单细胞测序无法给出固态异质化组织中细胞空间排布信息,对于揭示发育过程、病理微环境都存在很大的局限性。空间转录组测序以点阵形式记录病理切片细胞的空间信息并进行测序,可以精确指示点阵内的全部基因表达情况。空间转录组测序的加入,无疑让单细胞测序如虎添翼,更精确地勾勒了组织水平的异质性。苏州高通量测序空间转录组测序服务

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