广州BD Rhapsody单细胞平台

由于高通量测序实验方法相关的测序成本，使得单细胞实验往往非常昂贵，烈冰生物BDRhapsody单细胞测序服务珍视您的每一份样本，在平台搭建前，我们测试评估了BDRhapsody的性能，与BD官方公布的数据结合来看，将人293T和小鼠NIH/3T3细胞的1:1混合物以不同浓度上样到BDRhapsody卡式芯片上。存储的cDNA分子普遍扩增并进行低通量测序（每个细胞月8700个读数）。在测序数据中检测到1109个细胞的上样条件下，每个细胞中，来自每个细胞的平均99.4%的分子经检测为人或小鼠，这表明微孔之间的串扰非常小，在测序数据中检测到1000个或更少细胞的上样密度下，多重态发生率接近零，并且在15000个细胞下小于5%。深度的单细胞测序数据解读助力医疗健康大时代。广州BD Rhapsody单细胞平台

多样本数据合并：FractionofReadsKept：合并样本时，各样本根据MappedBarcodedReadsperCell数量计算出来的数据利用率。如果各样本间该参数值相差很大，需要进行Downsample处理，以数据量少的样本为基准将不同样本中细胞测序深度标化到同一水平，从而避免因测序深度差异导致的基因检测数量、基因表达水平的差异。烈冰科技自主研发的单细胞云平台致力于帮助每一位客户定制化分析数据，深度解读数据分析结果，深入挖掘其背后的生物学意义；从操作便捷、结果可视化、分析可追溯、系统稳定等方面助力单细胞研究，加速科研进程！厦门scRNA单细胞测序服务烈冰生物全国五大实验中心，多地部署BD Rahpsody平台，助您的样本更快速抵达“战场”。

您的珍贵样本，可以放心依赖烈冰生物BDRhapsody单细胞捕获系统，基于BD平台从原理到效率到通量的多重包容性，使得BD平台对实验过程存在的批次效应产生的可能性更小，可在技术、生物学、实验中心和用户之间的样本检测获得一致、可靠的结果，而磁珠的拆分使用和即时存储，可增加实验设计的灵活性，配套的BDScanner可视化工作流程质控，从细胞铺板前微孔板空板检测，到细胞上样、磁珠上样、磁珠洗涤扫描、细胞裂解、磁珠回收、回收磁珠扫描等全过程，均实现BDScanner的可视化质控，让您的每个样本在实验端全程无忧。

什么时候要用到去死细胞的操作呢？跟进烈冰生物多年单细胞测序服务经验来看，当细胞悬液进行质量和活性检测后，考虑对细胞活性在50%-70%的悬液进行去除死细胞的操作。而太低活性的悬液（小于30%），悬液中细胞大量死亡，可能已经丢失了原组织内的细胞比例和状态，失真严重，建议重新收集样本进行新的实验，保证数据的高质量和实验结果的准确性。但需要注意到，去除死细胞的操作会损失一定的细胞数量，因此希望您在提供样本时，尽可能提供足量的细胞，以备实验过程中可能存在的细胞死亡的问题，BD Rhapsody单细胞捕获平台对样本起始细胞量的要求较低，一般提供10万个细胞以上均可满足需求，特殊样本可详细咨询烈冰生物。单个细胞的基因结构和基因表达状态，并鉴定细胞的类型。

对于单细胞测序而言，常常需要先构建细胞图谱，在此基础上再开展后续各项分析，并且数据分析时以细胞聚类（cellcluster）为讨论对象，而不是像常规Bulk测序一样以组别为分析对象，因此单细胞测序项目对样本入组要求没有Bulk测序那样严格，但是单细胞测序，特别是目的为图谱研究时，需要通过提高样本复杂度（增加样本数），尽可能的构建某一疾病类型、群体细胞图谱信息。因此，单细胞测序实验设计时首先需要保证生物学重复，不同样本来源的样本建议单独进行细胞解离和捕获、建库、测序，以保证捕获到足够的细胞数，单个样本分别捕获细胞时，后续分析除了整体分析以外，还可以做单样本分析，保证分析的完备准确性。十二年测序经验，累计服务与5000余项重要科研项目。武汉BD Rhapsody单细胞多组学测序

单细胞多组学测序可识别重要的转录因子，进行谱系和发育追踪。广州BD Rhapsody单细胞平台

针对单细胞测序的细胞上样数，为什么不建议捕获到的细胞数量越高越好？一味地追求高数量的细胞捕获可能会存在一些问题。例如在上机细胞悬液浓度固定时，如果目标细胞捕获数增加到8000甚至10000，上样细胞悬液体积势必增加，在细胞悬液质量不是很理想（细胞活性5%、结团率均>5%）的情况下，引入的背景信号会增加，分析结果不理想的直接体现包括：cell、non-cell无法有效区分和Fractionreadsincells偏低。当cell和non-cell无法有效区分时，会使得数据出现假阳性和假阴性结果！当目标细胞捕获数很大时，多细胞率会增加，数据分析时，此部分“cell”表现为基因检测数和UMI检测数是正常cell的N倍（N是一个GEM包裹的细胞数），导致所有细胞的统计数据（单个细胞基因检测中位数、单个细胞UMI检测中位数）虚高。此部分“cell”虽然可以通过设置数据分析阈值进行过滤，但是容易会有此类数据的残留和正常高基因检测细胞的人为去除！广州BD Rhapsody单细胞平台

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