上海地区转录组高通量测序平台
核酸适配体测序,项目介绍:核酸适配体是一类能够特异性地和靶物质结合的寡核苷酸序列。它可作用于蛋白质、金属离子、小分子化合物、细胞膜表面受体等靶标。其结合能力可与抗体相当甚至更强,同时具有低免疫原性、 稳定性好等特点,并可结合各种药物及载体构建多元复合靶向给药系统用于tumour靶向treat, 在生物医学领域有潜在高价值。生工生物针对核酸适配体特殊结构,结合Illumina MiSeq测序平台,可以快速对核酸适配体文库进行大规模高通量测序,省去克隆测序的麻烦,提高测序深度,快速计算适配体序列频率,方便科研客户快速评估序列富集程度。如果是水体样品,建议采用滤膜过滤后,将滤膜寄送来生工。上海地区转录组高通量测序平台
通过显微镜使用血球计数板质检得到质检结果:明场(细胞未染色):主要可以观察悬液背景质量(背景干净,无杂质碎片,无细胞团块);台盼蓝场(细胞与台盼蓝染色后):主要可以观察活性(主要为活细胞,未染色蓝色的为活细胞);通过台盼蓝场计算活率:90%>80%;细胞浓度:710cells/µl;等结果来看,血球计数板质检结果的展示可以看出所有指标均符合上机标准,属于高质量单细胞悬液。以上就是我们本次的单细胞悬液质检指南分享啦。上海地区生工高通量测序公司KBSeq全质粒测序只能测菌液和质粒,像PCR产物什么的还是送一代测序吧。
生工高通量测序样品要求,组织/细胞样品:请使用新鲜取样的实验材料,当场分成小块后立即用液氮或干冰乙醇速冻,保存于-80°C冰箱,用足量的干冰(根据经验,在秋冬季节,如果打包合适,3公斤块状干冰可以维持30-40小时)寄送;于微生物样品,请客户如实声明所属物种,对于可能致病的微生物,生工保留拒收的权利;对于需要进行RNA抽提的样品,可以但不建议将组织在液氮中研磨后用TRIzol悬浮后用普通冰袋寄送,具体情况请先取得沟通。
对于用RNA组织保存液寄送的样品,请按照RNA组织保存液说明保存和寄送。请注意:1)样品浸入组织保存液之前,对于动物组织样品,须以建议快速度将样品剪切成厚度小于0.5cm的碎块;对于植物样品,须以建议快速度将样品剪切成厚度小于0.3cm的碎块。2)鼠肝、肾和脾等小organ样品和没有蜡质保护层的植物样品可不剪切直接放入保存液中保存,有蜡质保护层的植物样品需要先将蜡表皮破坏。3)确保将样品完全浸泡在保存液中,不让其粘贴在管壁和盖上。如果问现在什么技术是测序届的宠儿,那么单细胞测序则是我们不得不提及的技术了。
生工高通量测序样品要求,RNA样品:请提供浓度≥750 ng/μl、总量≥2μg的总RNA样品,样品请去蛋白并进行DNase处理;请务必提供每个样品具体的浓度、体积、制备时间以及物种来源。比较好附上QC数据,可以是电泳胶图、分光光度值、Nanodrop仪器检测数据或者Agilent Bioanalyzer仪器检测数据等;一般情况下,转录组测序需要Agilent Bioanalyzer仪器检测获得的总RNA 28S:18S≥1,RIN≥7;小RNA测测序不可采用常规柱式总RNA提取试剂盒,可选择传统总RNA提取法(如乙醇沉淀、异丙醇沉淀等)或者选用专门的小RNA提取试剂盒;寄送RNA样品请置于1.5 ml离心管中,管上注明样品名称、浓度以及制备时间,管口使用Parafilm封口。在运输前将所有样品管固定于50 ml带盖离心管中,再将50 ml管放在封口袋中。使用足量的干冰运输,并且尽量选用较快的邮递方式,以降低运输过程中样品降解的可能性。生工高通量测序部拥有丰富的样品处理经验,日均处理样品200余例。单细胞测序高通量测序应用
请注意选择无RNA酶的容器盛放样本,尽量避免RNA降解。上海地区转录组高通量测序平台
通过显微镜使用血球计数板质检能观察到悬液背景质量和细胞数目及活性的评估。让我们再来回顾一下台盼蓝染色原理:台盼蓝染色原理:台盼蓝不能透过活细胞正常完整的细胞膜,故活细胞不被染色。而死细胞的细胞膜透性增高,可使染料进入细胞内而使死细胞染成淡蓝色。怎样通过血球计数板进行质检操作呢?将血球计数板擦拭干净,取干净的盖玻片盖在计数板上;将细胞悬液混匀(或10µl台盼蓝+10µl细胞悬液),吸出10µl悬液至计数板上盖玻片的一侧使细胞核悬液铺满盖玻片和计数板之间;在显微镜下分别对V1/V2/V3/V4四个计数区域进行计数;按细胞计数公式进行计算,计算公式:细胞总数={(V1+V2+V3+V4)/4}*10000*悬液体积*稀释倍数,V1/V2/V3/V4为各个计数区的细胞数目,细胞活率=活细胞数目/总细胞数目*100%。上海地区转录组高通量测序平台
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