转染试剂作用
在难转染细胞(原代大鼠动脉平滑肌细胞)转染效率的比较
图片由芝加哥大学肺和重症护理系的 Nickolai Dulin 博士友情提供
制备大鼠的动脉平滑肌原代细胞并用使用 LipoD293™试剂(左图)和 Lipofecatmine 2000(L2K, 右图)分别将 GFP 的 cDNA(pEGFP-N3)按照生产制造商的转染操作步转染至该细胞。转染 24 小时后,用尼康 Eclipse 2000 荧光显微镜检测 GFP 荧光,以此来评价转染效率。
对难转染细胞 LNCap 细胞转染效率的比较
图片由罗斯威尔公园**研究所(Roswell Cancer Institute)的 Lyn Gao 博士友情提供
MagTransf 磁转染试剂实现高效转染解析.转染试剂作用
细胞转染过程:X-tremeGENE9DNA转染试剂简介:X-tremeGENE9DNA转染试剂是脂质和其它成分混合而得的一类多组份试剂,溶于80%乙醇中,经0.2μm滤膜过滤,然后封装于玻璃小瓶中,适用于细胞分析的多种实验。优势:1.具有细胞毒性极低、转染后细胞存活率高,生成可信任的生理学相关数据。2.操作简便、节省时间,只需对X-tremeGENE9DNA转染试剂进行简单稀释,再与质粒DNA共同孵育,即可直接向细胞添加反应混合物(有无血清均可)。3.对于常用细胞无需进行费时费力的优化非脂质体转染试剂哪种好siRNA脱靶效应会导致细胞死亡,并引起分析问题。
基于磷酸钙成分的转染试剂,其主要作用原理是与DNA通过沉淀反应形成磷酸钙-DNA复合物,粘附到细胞膜表面,借助内吞作用进入细胞质。pH值,钙离子浓度,DNA浓度,沉淀时间,细胞孵育时间乃至各组分加入顺序都可能对结果产生影响,因此实验条件摸索和优化时间较长,且重复性不佳。基于脂质体的转染试剂包括中性脂质体和阳离子脂质体两种。中性脂质体是利用脂质膜包裹DNA,借助脂质膜将DNA导入细胞膜内。目前应用比较***的是带正电的阳离子脂质体转染试剂,DNA并没有预先包埋在脂质体中,而是带负电的DNA自动结合到带正电的脂质体上,形成DNA-阳离子脂质体复合物,从而吸附到带负电的细胞膜表面,经过内吞被导入细胞。此方法操作简单,重复性好,在体外转染中有很高的效率,但具有一定的细胞毒性,可能会干扰细胞的代谢。且活性受血清影响,需要去除血清。
细胞转染如果以上都没有问题,那么******重要的环节就是慢***质粒转染293T细胞了,转染效果直接影响着出毒效率,那么一款好的转染试剂在此时就是至关重要了!在这里给大家推荐一款性价比超高的转染试剂,美国Polysciences家的PEIMAX40K!PEIMAX40K(也称为游离碱PEI22K)是一种功能强大,值得信赖且经济高效的瞬时转染试剂。在HEK293和CHO表达系统中,能在96孔板至100L生物反应器范围内提供始终如一高效的基因表达。越来越多的研究人员和公司使用PEI来替代其他类型转染试剂,以获得他们所需要的优势。相较于其他类型转染试剂,使用自行制备的PEI转染试剂可以使总转染成本降低高达40%左右。ThomasM,etal(2005)研究数据表明,去乙酰化的PEI40000(PolyethylenimineMAX40000)体外质粒DNA转染效率提高21倍,小鼠体内靶向效率达到10000倍,随之肺部特异疗效显示增强1500倍。转染是将核酸导入真核细胞中的过程,是细胞生物学、基因表达和基因***实验中的关键步骤。
.在多种不同类型细胞中基因敲除效率超过90%。
2.高灵活应用, 同一试剂可用于siRNA和质粒共转染的基因沉默实验。
3.细胞毒性低,结果相关性好,确保所观察到的细胞效应是由转染的siRNA而非转染过程本身介导。
4.兼容含血清或不含血清的培养基,转染前后均无需换液(如无血清培养基)。
图4. X-tremeGENE siRNA Transfection Reagent用于4种细胞系的HPRT基因沉默实验。根据各试剂说明书建议的操作流程,或标准实验方法,将100nM HPRT特异性siRNA转染至4种细胞。 通过LightCycler® h-HPRT Housekeeping Gene Set的荧光定量法评估基因沉默效率。结果显示用罗氏这款试剂在四种细胞中转染后基因沉默表现均表现优异。 临床级******毒载体生产必备转染试剂..非脂质体转染试剂哪种好
各种转染试剂成分分析.转染试剂作用
用 LipoD293™ 体外 DNA 转染试剂(Ver. II)(上图)和受欢迎的品牌产品 Invitrogen 公司的 293fectin™(下图)转染 pEGFP-C1 质粒到 HEK293 细胞中。转染 24 小时后,细胞的尼康 Eclipse 荧光显微镜 DIC 成像图(左侧)和荧光成像图(右侧)。
对悬浮 HEK293F 产生蛋白质效率的比较/
30 毫升的 293F 细胞分别使用 LipoD293™试剂、293fectin、Xfect 和 Fugene 6 等转染试剂按照生产商的标准转染步骤将 pEGFP-6xHis 质粒导入细胞表达,用量为 LipoD293™ 试剂,20 微克,所有其他三种转染试剂均使用 30 微克质粒 DNA。 转染试剂作用
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