徐州萤火虫荧光素酶D-荧光素钾盐活题成像

时间:2022年08月10日 来源:

    LAR)Promega公司推出的第一种萤光素酶检测试剂LuciferaseAssaySystem(LAR),为灵敏、非放射性的报告基因检测拉开了序幕。LAR与萤火虫萤光素酶(luc)报告基因一起,为研究人员开始了解基因表达调控因子提供了首要的工具。[1]1995Dual-Luciferase®报告基因检测系统(DLR)DLR是第一种允许在单个样本中依次检测两个报告基因的试剂。通过允许萤光素酶活性的内部归一化,在提高报告基因检测的可靠性方面取得了关键进展。此外,pGL3报告基因载体系列具有改良后的萤火虫萤光素酶基因,luc+。这个改造一种报告基因以实现性能改进的例子后来被进一步应用到pGL4和luc2报告基因上,通过生物信息学和合成方法,实现了更大的改进。[1]1999ENLITEN®/UltraGlo™重组萤光素酶Promega公司在早期推出的一种重组萤火虫萤光素酶(Enliten)基础上,改造出了一种称为UltraGlo™的热稳定性萤光素酶。UltraGlo™的开发是在各种检测和储藏条件下进行一步法“加样-读数”检测的关键。此后,通过开发新的方法来改变萤火虫萤光素酶检测的信号动力学,例如Bright-Glo™、Steady-Glo®和Dual-Glo®允许使用微孔板进行检测。而“加样-读数”的形式简化了样品处理。D-荧光素钾盐找南京翌科生物科技有限公司怎么样?徐州萤火虫荧光素酶D-荧光素钾盐活题成像

    通过开发新的方法来改变萤火虫萤光素酶检测的信号动力学,例如Bright-Glo™、Steady-Glo®和Dual-Glo®允许使用微孔板进行检测。而“加样-读数”的形式简化了样品处理,并实现了在非常高通量的应用中使用报告基因检测。[1]随着UltraGlo™萤光素酶的发展,现在已经实现了“加样-读数”的ATP检测方法。ATP是细胞健康的重要指标,这使得CellTiter-Glo®能有效测定细胞活力,尤其是在高通量应用中。该检测原理还促进了其它ATP检测平台的诞生,尤其是用于研究ATP酶(如激酶)的Kinase-Glo®(2004年)和ADP-Glo™(2009年)酶检测系统。[1]2003Caspase-Glo®3/7检测除了可以利用萤火虫萤光素酶反应测定样品中萤光素酶或ATP的含量外,还可以检测底物(luciferin)浓度的变化。通过将luciferin与可被不同酶类识别并产生反应的保护基团偶联,能对这些酶进行灵敏的“加样-读数”检测,如半胱天冬酶(caspase)和其它蛋白酶。[1]2007One-Glo™萤光素酶检测系统随着对萤火虫萤光素酶化学反应的进一步了解以及Promega生物学家和化学家团队的建立,一种改进的luciferin面世,能更好地用于典型的报告基因检测应用。这种新的底物——fluoroluciferin。徐州萤火虫荧光素酶D-荧光素钾盐活题成像D-荧光素钾盐的合作平台有哪些?

    2-乙磺酸)PIPES磷酸烯醇**酸三(环已胺)盐PEP病毒保存液肝素锂乙二胺四乙酸二钾/EDTA二钾血清分离胶/血液分离胶肝素抗凝剂乙二胺四乙酸三钾/EDTA三钾血液促凝剂高效促凝粉高效硅化剂水溶性硅化剂草酸钾钙离子螫合抗凝剂弱效抗凝剂吖啶酯己二酰阱NSP-DMAE-ADH吖啶酯-T4结合物吖啶酯-T3结合物吖啶磺酰胺盐-N-乙胺基马来酰亚胺吖啶磺酰胺盐-T4结合物吖啶磺酰胺盐-T3结合物生物素-T4结合物化学发光分析试剂及标记物生物素-T3结合物生物素-NHS活性酯吖啶磺酰胺NSP-SA-ADH吖啶酯NSP-DMOAE-NHS吖啶酯NSP-DMOAE-PEG-GT-NHSCy3-NHS酯Cy7-NHS酯5-羧基荧光素-NHS酯6-羧基荧光素-NHS酯5(6)-羧基荧光素-NHS酯6-羧基荧光素D荧光素钠盐D-Luciferin,SodiumSaltD-荧光素钾盐D-Luciferin,PotassiumSaltD-荧光素萤火虫,游离酸D-LuciferinFirefly,freeacid萤火虫荧光素酶fireflyluciferase海肾荧光素酶Renillaluciferase天然腔肠荧光素Coelenterazineh腔肠素hCoelenterazinef腔肠素fCoelenterazineh/腔肠素h腔肠荧光素运输和保存冰袋运输;-20℃干燥避光保存;有效期一年。使用方法1.体外生物发光检测1)用无菌蒸馏水溶解D-荧光素钠盐,配制成30mg/mL的储存液(100-200×),混匀。立即使用。

    因此只有在活细胞内才会产生长发生光现象,并且发光光强度与标记细胞的数目线性相关。结构与性能荧光素在氧气、ATP存在的条件下和荧光素酶发生反应,生成氧化荧光素(oxyluciferin),并产生长发生光现象。荧光素是腹腔注射或尾部静脉注射进入小鼠体内的,约一分钟就可以扩散到小鼠全身。荧光素的半衰期约三个小时,只有活细胞才能够持续表达荧光素酶。(1)荧光素不会影响动物的正常生理功能。(2)荧光素是280道尔顿的小分子,水溶性和脂溶性都非常好,很容易穿透细胞膜和血脑屏障。(3)荧光素在体内扩散速度快,可通过腹腔注射或尾部静脉注射进入动物体内。腹腔注射扩散较慢,持续发光长。荧光素腹腔注射老鼠后约1min后表达荧光素酶的细胞开始发光,10min后强度达到稳定的更高点,在更高点持续约20~30min后开始衰减,约3h后荧光素排除,发光全部消失,更佳检测时间是在注射后15~35min之间;若进行荧光素静脉注射,扩散快,但发光持续时间很短。科研人员根据大量的实验总结出荧光素的合适的用量是150mg/kg,即体重20克的小鼠需要3毫克的荧光素。(4)观察时间的间隔没有更短限制,只要观察的条件控制一致就可以。虽然底物在动物体内有一定的代谢过程。D-荧光素钾盐如何选择合作公司?

    4)待图像分析前,向细胞内添加荧光素工作液,37℃孵育5-10min,然后进行图像分析。2.活ti成像分析1)用无菌的DPBS(w/oMg2+、Ca2+)配制15mg/mL的荧光素的储存液,混匀。2)用µm滤膜过滤除菌。立即使用,或分装于-20℃避光保存,避免反复冻融。3)腹腔注射(.),按照150mg/kg的荧光素/体重浓度进行注射,以小鼠为例,每只小鼠体重假定20g,每只小鼠用量3mg;4)注射入体内10-15min(待光信号达到更强稳定平台期)后进行成像分析。注:建议对每只动物模型都需要建立荧光素酶动力学曲线,从而确定更高信号检测时间和信号平台期。注意事项1)本品(fireflyluciferin)和甲虫荧光素(beetleluciferin)、萤光素钾盐只是不同别名,以CAS号115144-35-9为准。2)注射方式、动物类型以及体重等都会影响信号的发射,因此建议每次实验都要做荧光素酶动力学曲线,确定更佳信号平台期和更佳的检测时间。3)如果要进行ATP的检测,尽量避免外源ATP的污染,如操作时戴手套并使用ATP-free的实验耗材,在进行荧光素的溶解时应使用ATP-free无菌水。4)为避免反复冻融,本产品配制成溶液后建议适当分装后-20℃或-80℃保存。为防止氧化,如有条件,可以对储存液充氮气或氩气后保存。D-荧光素钾盐使用的是什么技术?南京荧光素酶D-荧光素钾盐哪家好

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    从而实时监测疾病发展状态或药物的***功效等。也可以利用ATP对此反应体系的影响,根据生物发光强度的变化来指示能量或生命体征。,PotassiumSalt/D-荧光素钾盐分子式:NaC11H7N2O3S2·H2O分子量:g/mol纯度:高级纯()应用:1)活细胞、组织或生物体内luc标记基因和荧光素酶-融合基因体内/体外表达的成像分析;2)***用于报告基因分析,免疫分析和ATP荧光卫生监测分析;Protocol1:InVitroBioluminescentAssays/体外生物发光检测1)配制成100mM的储存液(200×,浓度30mg/ml)。混匀后立即使用或分装后-20℃冻存。2)用预热好的组织培养基1∶200稀释储存液,配制工作液(终浓度150μg/mL)。3)去除培养细胞的培养基直至无残留。4)图像分析前立即向细胞内添加1×荧光素工作液,然后进行图像分析(或者细胞放在37℃短时间孵育后检测可增强信号)。D-荧光素钾盐注:萤光素、萤光素酶、萤火虫萤光素酶、萤光素钾盐、萤光素钾盐盐也经常被称作荧光素、荧光素酶、萤火虫荧光素酶、荧光素钾盐、荧光素钠盐。Protocol2:Invivoanalysisinmice/小鼠***成像分析1)用无菌的DPBS(w/oMg2+、Ca2+)配制D-荧光素钾盐溶液(15mg/mL),。一旦使用,保持冰冷且避光。徐州萤火虫荧光素酶D-荧光素钾盐活题成像

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