苏州高离心力离心管咨询

一提起蛋白质浓缩、更换缓冲液，我们都会想起超滤。这是一种我们都很熟悉的膜分离技术。它可用来分离溶液中极小的颗粒和溶解的分子。这种方法的较大特点是操作简便，只需要浓缩离心管和离心机，即可圆满完成我们的任务。与层析、透析等方法相比，超滤对被处理的分子更加温和。它不需要有机萃取，就不会导致蛋白变性。这种方法非常高效，可同时浓缩和纯化分子。操作可在低温（比如冷库）下进行。另外，快速、便宜，也是许多人青睐它的原因。浓缩离心管的操作很简单。选择适当的浓缩离心管，加入待处理的样本，按照离心管的指示进行离心操作，之后回收截留的样本。在离心力的作用下，溶液中的小分子溶质和溶剂透过超滤膜，被收集在滤过液收集瓶中，而大分子溶质被超滤膜截留在浓缩离心管中。这种分离的主要依据是分子大小，但分子形状和电荷等其他因素也会有影响。超滤离心管通常需要冷藏保存，以保持其性能和寿命。苏州高离心力离心管咨询

超滤管采用其特有的再生纤维素膜，定义为：一个确定NMWL 的超滤膜应该截留至少90% 以上的这个大小的球形分子，即100kDa的球形蛋白用100k的再生纤维素膜得率超过90%。请仔细查看以下默克生命科学官方数据：(以0.5mL的AU0.5为例，其它型号截留分子量的选择原则一致，具体离心力和离心时间不同。截留分子量选小啦！看到这个表，你是否发现原来抱怨超滤管流速偏慢的根源来自对于截留分子量定义的误解。膜孔径要小于目的分子这是一原则。如果分子有近似球形的立体结构(而非明显的线性分子)，在再生纤维素超滤膜体系内，选择“等于”或“略小于”目的分子的截留分子量的超滤管是较佳选择，这样操作起来又快又好，既保证了样品回收率，又缩短了离心时间，大幅降低大分子损伤风险。苏州高离心力离心管咨询超滤离心管可以用于制备疫苗、抗体等生物制品，以缓解某些疾病。

超滤离心管使用注意事项：（1）选择合适的超滤管。通常应截留分子量不应大于目的蛋白分子量的1/3，比如目的蛋白分子量为35kDa，就可以选择10kDa截留分子量的超滤管。若目的蛋白分子量为10kD左右，则可以用截留分子量3kD的超滤管。认真阅读使用说明书，注意超滤膜对各种化学物质的耐受程度有所不同。2）新买来的超滤是干燥的，使用前加入超纯水，水量完全过膜，冰浴或冰箱里预冷几分钟。然后将水倒出，即可加入蛋白液，加入的多少，以不超过管顶的白线为准。操作要轻，加入蛋白液前，超滤管需要插在冰上预冷。（3）平衡。质量和重心二者都要达到平衡。注意转速和加速度不可太快，否则直接损坏超滤膜。开始离心超滤（离心机预冷至4度）。不同离心机的转速 rpm换算成g之后，有所不同。离心机的加速度调至较低档，减小对膜的压力。注意，一定要等离心机达到目的转速之后，方可离开离心机，否则离心机出问题时，无法一时间处理。膜与转轴的方向根据说明书调整（角转离心机的情况是膜与轴垂直）。在实际使用中，一般转速开的比说明书里的要低，这样可以延长离心管的使用寿命。

下面是处理和重复使用超滤管的步骤。将超滤管中的水倒出来，用Milliq水轻轻冲洗几次。[如管底有可见蛋白质沉淀，可先加水，再用设备头吹气，注意不要碰触膜，吹气至沉淀悬浮，再倒出，不要冲自来水。)然后加入0.2 mNaOH溶液，室温放置20分钟，平衡超滤。在此期间定量管。离心10分钟。倒出剩余的MaOH溶液，将管芯浸入Milliq烧杯（1L或2L)中。放器数小时，然后用新水替换，放置数小时，不断稀释Na0E浓度。50ml管道和盖子用自来水冲洗，内壁用Milliq水冲洗。取出浸入水中的芯，并将其加入几乎满毫升的水中。在50毫升试管中注入毫升水。慢慢地将芯放入50毫升离心管中，排出一些水。然后盖上盖子，4度存放，直到下次使用。一般来说，根据上述步骤和注意事项，每根渠道在三到四年内不会受损。超滤离心管还可以在生物医学领域中用于制药工艺的监测和控制。

超滤离心管通常不需要预处理即可使用，不过对于蛋白质样本处理，特别是较稀的蛋白质溶液来说(<10ug/mL),用超滤膜浓缩回收率常常是不定量的。虽然PES材料使非特异吸附较小化，但是,某些蛋白,特别是稀的时候,会有问题。非特异结合的程度随着个别蛋白结构的不同而不同。含有带电的或者疏水结构域的蛋白质更易于不可逆结合到不同表面。对超滤离心管表面做钝化预处理可降低蛋白质在膜表面的吸附性损失，大多数情况下，在浓缩稀蛋白溶液之前预处理柱子可以提高回收率，因为溶液可填满膜和表面暴露的空白蛋白吸附位点。钝化的方法是预先用较高容积的钝化溶液预浸泡柱子1小时以上，蒸馏水彻底冲洗柱子，再用蒸馏水离心一次以彻底除去可能残留在膜上的钝化溶液。注意钝化处理后别让膜干了。如果要留待以后使用，需要加无菌蒸馏水保持膜湿润。使用超滤离心管时应注意避免振动或震动造成样品混乱并影响分离效果。苏州高离心力离心管咨询

使用超滤离心管时应注意避免污染和交叉传播，并对设备进行彻底清洁消毒。苏州高离心力离心管咨询

塑料离心管的优点是透明或者是半透明的，它的硬度小，可用穿刺法取出梯度。缺点是易变形，抗有机溶剂腐蚀性差，使用寿命短。塑料离心管都有管盖，它的作用是防止样品外泄，尤其是用于有放射性或强腐蚀性的样品时防止样品外泄是很重要的一点；管盖还有一个作用是防止样品挥发以及支持离心管，防止离心管变形。在挑选这一点的时候还要注意检查管盖是否严密，在试验时能否盖严，以到达倒置不漏液；我们都知道在塑料离心管中，常用材料有聚乙烯PE)，聚碳酸酯(PC)，聚丙烯(PP)等，其中聚丙烯PP管性能会相对较好，所以，我们在挑选塑料离心管时尽可能的考虑聚丙烯的塑料离心管。苏州高离心力离心管咨询