香港浓度精子分析VAP

美国Hamilton Thorne的TOX IVOS精子分析仪已经被FDA和国内外毒理学实验室所使用。本试验研究目的对精子分析仪和血细胞计数板在大鼠附睾精子计数结果的比较验证。方法选取三批次雄性SD大鼠60只,每批20只,对三批次雄鼠的精子计数进行比较。健康雄鼠通过戊巴比妥钠麻醉实施安乐死后,取左侧附睾尾称重,将附睾尾部放入37℃预热的含有M199培养液平皿中,剪碎附睾尾,放入培养箱中37℃孵育5 min,然后吸取1份精子悬液,用M199培养液进行一定倍数的稀释,混匀后,取1滴稀释液,滴入精子分析仪**载玻片上,将载玻片放入TOX IVOS精子分析仪载物台,进行精子计数,同时吸取稀释后的精子悬液滴入血细胞计数板内,通过光学显微镜进行计数,比较两种计数方法的差异性。结果***批次雄鼠精子分析仪和血细胞计数器的精子计数结果分别为70.2±33.2,61.0±27.1;第二批次雄鼠精子分析仪和血细胞计数器的精子计数结果分别为128.8±116.8,114.6±86.9;第三批次雄鼠精子分析仪和血细胞计数器的精子计数结果分别为165.9±91.7,140.0±59.6。三个批次的精子分析仪和血细胞计数板的精子计数结果无统计学差异(P>0.05)。结论精子分析仪是一种方便、可靠、快速、高效的研究工具,在生殖毒理学研究中具有重要的应用价值。Hamilton Thorne精子分析仪具有快速、高效、智能化的特点，能够满足用户对精子分析的多方面需求。香港浓度精子分析VAP

二、生化及免疫学检验：1、精浆果糖测定【正常参考值】9.11-17.67mmol/L。【临床意义】（1）精液果糖为0，可见于先天性两侧输精管及精囊腺缺如、两侧输精管完全阻塞或逆行**。（2）精液果糖降低，常见于精囊炎和雄***分泌不足，果糖不足可导致精子运动能量缺乏，甚至不易受孕。2、精浆酸性磷酸酶测定【正常参考值】金氏法：＞255nmol·s-1/L【临床意义】（1）精浆酸性磷酸酶含量增高，常见于前列腺肥大或早期前列腺恶性**患者。（2）精浆酸性磷酸酶含量降低，常见于前列腺炎患者。（3）精浆酸性磷酸酶检测是法医鉴定有无精液**敏感的方法。3、精浆顶体酶活性测定【正常参考值】36.72±21.43U/L。【临床意义】精子顶体酶活力与精子密度及精子顶体完整率呈正相关，其活力不足，可导致男性不育。4、精浆乳酸脱氢酶-X同功酶(LDH-X)测定【正常参考值】LDH-X***活性：2620±1340U/L；LDH-X相对活性：≥0.426。【临床意义】LDH-X具有睾丸及精子的组织特异性，是精于运动获能的关键酶，该酶检测可作为诊断男性不育有价值的指标。睾丸萎缩患者LDH-X降低或消失，精子发生缺陷时无LDH-X形成，少精或无精者可致LDH-X活性降低。服用棉酚也可抑制此酶活性。广州计数精子分析WOBCASA系统通过计算机分析精子运动参数，能够提供精确的量化数据，优于人工检测方法。

人类精子冷冻保存和储存：增加了冷冻样本的安全性、精液冷冻保存方案、快速液氮熏蒸冷冻、冷冻精液的解冻、玻璃化冷冻等内容，更具可操作性。本手册对人类精子的冷冻保存提出了具体建议：将样本分管分罐分开储存；对使用的材料和留存标本建立定期核验程序；所有储罐都应有液位监控报警系统，以监测温度和液氮液位，传感器应连接警报器，可通过实验室人员的终端进行提醒。新证据表明，玻璃化冷冻是冷冻保存精液的一种有价值的方法。该方法的原理是将小体积样本与无污染液氮直接接触并快速冷冻，可以防止冰晶的形成，并减少精子的渗透性损伤。在麦管玻璃化冷冻(无菌玻璃化冷冻)中，也可以使用封闭系统，不需要无菌的液氮。

精子手工计数原理及操作方法

1.原理：将精液用适当的稀释液作一定量稀释后，混匀注入计数池内计数，再算出每毫升精液中精子数。2.方法（按照***版第四版《全国临床检验操作规程》）1).于小试管内加精子稀释液0.38ml,取液化精液20μl,加入稀释液内混匀。2).充分摇匀后,滴入改良Neubauer计数板的计数池内,静置1~2分钟,待精子下沉后,以精子头部作为基准进行计数。

3.计算1).如每个**中方格内精子少于10个,应计数所有25个中方格内的精子数。2).如每个**中方格内精子在10~40个,应计10个中方格内的精子数。3).如每个**中方格内精子多于40个,应计数5个中方格内的精子数。公式：精子数=计数结果/计数中方格×25×1/计数池高度×20×103/ml=计数结果/计数中方格×1/计数池高度×5×103/ml CASA系统操作简便，检测速度快，且重复性优于人工检测。

CASA系统进行**分析应注意以下几点：

3.2**分析仪阈值的确定（1）精子灰度、对比度阈值：由于分析仪是根据灰度的高低来判断精子的真伪，对亮度和对比度要求特别高，检测时应多次试用，寻找能准确识别精子的比较好灰度阈值[8]。（2）碎片：测定精子浓度准确性受**中细胞成份和非精子的颗粒物质的干扰，测定活动精子的百分率也受精子中非精子物质的影响[9]，这些也是需要注意的。对于系统误认为精子的非精子成分，如精原细胞、白细胞和非白细胞颗粒等，可人为准确记数后在可删除杂质一栏将其舍去。3.3出现1次异常结果应间隔复查反复检查2�3次方能得出比较正确的结果。3.4对于无精子的患者应仔细进行视野检查注意不要将杂质误认为精子计数在内，应将**3000ɡ离心15分钟后，再涂片检查，确认无精后再出报告。 传统的CASA系统仍使用传统阈值图像处理方法，准确率有待提高。南京计数精子分析W.H.O 5

精子分析仪参数，精子头侧摆幅度（ALH）‌：精子头关于其平均路径的侧向位移幅度。香港浓度精子分析VAP

[临床意义]1. 若数日未**、且精液量少于1.5ml者为不正常，说明精囊或前列腺有病变；若精液量减至数滴，甚至排不出，称为无精液症，见于生殖系统的特异性***，如结核、淋病和非特异性炎症等。2．若精液量过多(一次超过8ml)，则精子被稀释而相应减少，有碍生育。二、颜色检查[正常参考值]灰白或乳白色，久未**者可呈浅黄色。[临床意义]1．黄色或棕色脓样精液：见于精囊炎或前列腺炎等。2．鲜红或暗红色血性精液：见于生殖系统的炎症、结核和**等。三、粘稠度和液化检查[正常参考值]粘稠胶冻状，30分钟内自行液化。[临床意义]1．精液粘稠度低，似米汤样，可因精子量减少所致，见于生殖系统炎症。??2．液化时间过长或不液化，可抑制精子活动而影响生育，常见于前列腺炎症等。四、精子活动率检测[正常参考值]正常精子活力一般在Ⅲ级(活动较好，有中速运动，但波形运动的较多)以上，**后1小时内有Ⅲ级以上活动能力的精于应＞0.60。[临床意义]如果0级(死精子，无活动能力，加温后仍不活动)和Ⅰ级(活动不良，精子原地旋转、摆动或抖动，运动迟缓)精子在0.40以上，常为男性不育症的重要原因之一。香港浓度精子分析VAP