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如何进行血清灭活处理?血清请先按上述「血清应如何融解」中的操作步骤融化和混匀,热灭活时请将血清置于56℃水浴30分钟。为尽量减少热灭活对血清品质的影响,一次灭活的血清体积不宜过大。比较好准备同样的容器装相等体积的水(与血清相同温度),灭活时将装有血清和水的容器同时放入56℃水浴,在装水的容器中放置温度计,加热过程中不时轻轻旋转混匀血清,当温度计显示达到56℃左右,开始计时。56℃水浴后,建议马上转移到冰上降温。富含一些可供贴壁细胞型细胞贴壁生长的基质成分。青海鸡血清哪里有卖
瓶装血清解冻需采用逐步解冻法:-20℃至-70℃低温冰箱中的血清放入4℃冰箱中溶解1天.然后移入室温,待全部溶解后再分装.在溶解过程中需不断轻轻摇晃均匀(小心勿造成气泡),使温度与成分均一,减少沉淀的发生.切勿直接将血清从-20℃进入37℃解冻,这样因温度改变太大,容易造成蛋白质凝集而出现沉淀.一般厂商提供的血清为无菌,无需再过滤除菌.如发现血清有悬浮物,则可将血清加入培养液内一起过滤,切勿直接过滤血清.血清中的沉淀物絮状物:主要是血清中的脂蛋白变性及解冻后血清中纤维蛋白造成,这些絮状物不会影响血清本身的质量.可用离心3000rpm,5分钟去除,也可不用处理.显微镜下"小黑点":经过热处理过的血清,沉淀物的形成会明显增多.有些沉淀物在显微镜下观察象"小黑点",常误认为血清受污染.一般情况下,此小黑点不会影响细胞生长,但如果怀疑血清质量,则应立即停止使用,更换另一批号的血清.切勿将血清在37℃放置太久,否则血清会变得浑浊,同时血清中的有效成分会破坏而影响血清质量.南通胎牛血清相同动物细胞代谢进程中有许多物质是动物细胞所必需而本身无法组成的的,例如碱基、氨基酸等微量物质。
组份与比例不同胎牛血清和新生牛血清两者所含的促细胞生长因子、促贴附因子、及其他活性物质等组份与比例不同。03用途与用法不同某些细胞必需胎牛血清才能生长,而有些细胞只需小牛血清即可,使用浓度不同,一般在5%-10%,有特殊要求的浓度在20%。血清保存和使用须注意:血清应保存在-5℃至-20℃,若存放在4℃不可超过一个月。解冻血清时,应先将血清至于2-8℃冰箱,并经常摇匀使之溶解,然后至室温放置使之升温,一定不可将冷冻的血清直接放入37℃水浴或者温箱中,如放在37℃解冻,颜色加深,粘稠度也会增加,血清在解冻和热灭活后,应按用量分装并于-20℃保存,避免反复冻融。
何谓热灭活一般是以56℃,30分钟来处理已解冻的血清,因为此加热步骤,可以使补体去活化,而补体所参与的反应有:溶细胞活性,平滑肌的收缩,肥大细胞和血小板组胺的释放,增强吞噬作用,淋巴细胞、巨噬细胞的趋化和焕活。有必要做热灭活吗?实验显示,经过正确处理的热灭清,对大多数的细胞而言是不需要的。经此处理过的血清对细胞的生长只有微小的促进,或完全没有任何作用,甚至通常因为高温处理影响了血清的质量,而造成细胞生长速率的降低。而经过热处理的血清,沉淀物的形成会明显的增多,这些沉淀物在倒立显微镜下观察,像是"小黑点",常常会让研究者误以为是血清遭受污染,而把血清放在37℃环境中,又会使此沉淀物更增多,使研究者误认为是微生物的分裂扩增。购买的时候注意询问厂家是否是已灭清。细胞培养时,要保证细胞可以顺利生长和增殖,需添加10%~20%的血清,动物血清还可起到酸碱度缓冲液的作用。
放射免疫法以不同稀释度的抗血清与质量标记抗原混合,孵育24h后,测定其结合率。通常以结合率为50%的血清稀度和为效价。如某抗血清的结合率为50%时的稀释度为1:15000,则该血清的效价就是1:15000。抗血清的效价,除由抗血清本身的性质决定外,还受标记抗原的质量、孵育时间,所用稀释液的成分及其pH等因素的影响,在工作中必须引起注意。(2)双向扩散法利用大分子抗原和抗体在琼脂平板上扩散,两者在相交处产生沉淀线,以观察和判断抗血清中是否有抗体及其浓度。球脂板的制备:100mlpH7.1的磷酸盐缓冲液加到15g的琼脂内,于水浴中加温搅拌,使琼脂完全溶解,趁热用纱布过滤,待溶液冷却到65°C左右时,加入叠氮钠(NaN3),使其在溶液中的浓度为0.1%。用移液管把琼脂放在干净平皿或玻片上,约3mm厚,待其冷却,完全凝固后,用打孔器打孔。中间孔内加适量抗原(容量为50ul)周围各孔内分别加入50ul1:2、1:4、1:8、1:16、1:32及不稀释的抗血清,37°下孵育24h,观察有无沉淀线产生,以判断血清的稀释度。血清中富含蛋白质、氨基酸、葡萄糖等,其间蛋白质主要为白蛋白和球蛋白。青海鸡血清哪里有卖
它们的效果十分重要,细胞需求它们组成核酸和蛋白质,缺少要导致细胞成长不良乃至死亡。青海鸡血清哪里有卖
1989年左右,也有国外学者建议用猪血清取代牛血清,用于培养制造非洲猪瘟病毒的细胞(见《动物检疫》1991年01期《猪血清中的牛血清白蛋白抗体引起非洲猪瘟血清学诊断的假阳性反应》),原因是牛血清中的白蛋白会干扰非洲猪瘟抗体的检测,造成假阳性反应。其他动物源血清兔血清:兔血清通常从六个月或更小的动物身上收集,可用于与BSA结合用作免疫细胞化学[1]和免疫组织化学中的封闭血清。山羊血清:多用做封闭液,也有一些研究人员发现,质量的山羊血清可用于某些细胞的培养。鸡血清:从屠宰供人类食用的健康鸡中收集的。有研究用于血清维生素B12的放射性同位素稀释测定 青海鸡血清哪里有卖
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