上海分子生物学Real-time PCR设计公司

Real-time PCR链式反应的特点：灵敏度高：PCR产物的生成量是以指数方式增加的，能将皮克(pg=10-12）量级的起始待测模板扩增到微克（μg=-6）水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞；在病毒的检测中，PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位）；在细菌学中很小检出率为3个细菌。简便、快速：PCR反应用耐高温的TaqDNA聚合酶，一次性地将反应液加好后，即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应，一般在2～4小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析，不一定要用同位素，无放射性污染、易推广。纯度要求低：不需要分离病毒或细菌及培养细胞，DNA粗制品及RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活组织等DNA扩增检测。武汉微量Real-time PCR供应商聚合酶链反应的试剂应分配到一次性的等分试样中。实时定量PCR通用电脑，自动分析软件等构成。上海分子生物学Real-time PCR设计公司

Real-time PCR探针法适用于：1、具有高适应性和可靠性，实验结果稳定重複性好，特异性更高。2、适用于扩增序列专一的体系的检测。3、样品中靶基因含量过低的定量PCR检测。4、靶基因的特异序列较短，无论怎样较佳化引物设计条件都不能解决。5、存在与靶基因同源的序列，在PCR中容易出现非特异性扩增，对特异性要求较高的定量。6、普遍用于人类传染病的诊断和病原定量,在动物病原体基因的检测,畜禽产品的检验检疫,生物製品的鉴定。Real-time PCR探针法:PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的萤光探针，该探针为一寡核苷酸，两端分别标记一个报告萤光基团和一个淬灭萤光基团。探针完整时，报告基团发射的萤光信号被淬灭基团吸收；PCR扩增时，Taq酶的5’-3’外切酶活性将探针酶切降解，使报告萤光基团和淬灭萤光基团分离，从而萤光监测系统可接收到萤光信号，即每扩增一条DNA链，就有一个萤光分子形成，实现了萤光信号的累积与PCR产物形成完全同步。深圳实时荧光PCR应用聚合酶链反应五要素：参加PCR反应的物质主要有五种即：引物、酶、dNTP、模板和缓冲液。

Real-time PCR从用途上分可以分为定性分析和定量分析：定性分析指的是用于分析待检测的样本中是否存在我们想要检测的成分，即待检测成分有无的分析。通常，定性分析可以应用于病毒以及病原菌的检测，物种鉴定以及基因分型等。病毒及病原菌检测，如SARS、H1N1病毒，都可以通过Real-time PCR的方法进行高灵敏度的检测，定性分析样本是否已被病毒传播。物种鉴定如我们国家的一些检验检疫机构，想要检测进口的牛肉制品中是否含有鸡源、猪源或鸭源等成分，或者用于检测羊奶中是否会掺有牛奶等等，可以通过Real-time PCR的方法进行检测。基因分型，如啤酒型，肥胖型基因的检测，就是Real-time PCR在基因分型方面的应用。

Real-time PCR：使用Real-time PCR进行基因检测,被普遍应用于病毒和病原菌检测、转基因食品检测、遗传病基因检测等领域。一般首先需要利用专业使用的试剂盒从待检样品中提取其核酸（DNAorRNA），并经过精制等复杂的操作（通常称为前处理操作）之后才可以进行Real-time PCR。不易受反应阻害物的影响，使用时不需要进行复杂的前处理操作，单单需将待检样品直接加入到检测试剂中即可开始检测。通过使用本产品，可以在更短的时间内，简便、低成本地进行Real-time PCR检测。聚合酶链式反应PCR技术的基本原理类似于DNA的天然复制过程。

Real-time PCR：所谓Real-time PCR技术，是指在PCR反应体系中加入萤光基团，利用萤光信号累积实时监测整个PCR进程，之后通过标準曲线对未知模板进行定量分析的方法。利用萤光信号的变化实时检测PCR扩增反应中每一个循环扩增产物量的变化，通过Ct值和标準曲线的分析对起始模板进行定量分析。Real-time PCR技术即实时萤光定量PCR避免了传统PCR以终产物监测定量产生的偏差，提高实验的重複性。该技术已经被普遍用于监测细胞mRNA表达量的变化；比较不同组织的mRNA表达差异；验证基因晶片，siRNA干扰的实验结果。使用Real-time PCR进行基因检测,被普遍应用于病毒和病原菌检测基因检测等领域。淮安血液荧光定量PCR

如果基因的基因组DNA序列是已知的，逆转录-聚合酶链反应可以用来绘制基因中外显子和内含子的位置。上海分子生物学Real-time PCR设计公司

所谓real-timeQ-PCR技术，是指在PCR反应体系中加入荧光基因，利用荧光信号累积实时监测整个PCR进程，之后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。在real-time技术的发展过程中，两个重要的发现起着关键的作用：（1）TaqDNA多聚酶的5′核酸外切酶活性的发现，它能降解特异性荧光记探针，因此使得间接的检测PCR产物成为可能。（2）此后荧光双标记探针的运用使在一密闭的反应管中能实时地监测反应全过程。这两个发现的结合以及相应的仪器和试剂的商品化发展导致real-timeQ-PCR方法在研究工作中的运用。上海分子生物学Real-time PCR设计公司

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