山西做得好的免疫组化检测

免疫组化中IHC vs ICC的区别。英瀚斯生物为您说明。除了生物学来源，IHC和ICC在样品处理的程度上也有所不同。ICC需要透化，要么通过固定过程，要么是单独的透化步骤，这样抗体才能与细胞内的靶点相结合。而IHC可能不要单独的透化步骤，这取决于切片的厚度和固定方法。包埋在石蜡中的IHC切片必须进一步处理，才能进行抗体染色。一旦处理好样品，IHC和ICC的染色操作就几乎没什么差异了。当然，就染色而言，根据所使用的抗体来优化还是少不了的。免疫组化技术的原理、分类和优点！山西做得好的免疫组化检测

免疫组化结果背景染色较深的原因有哪些？

 （1）抗体浓度过高：一抗浓度过高是常见的原因之一。解决办法是，每次使用新抗体前应当对其工作浓度进行测试，使每一抗体个体化，找到适合自己实验室的理想工作浓度，既使是即用型的抗体也应如此，不能只简单的按说明书进行染色。

（2）抗体孵育时间过长或温度较高：解决办法是，严格执行操作规程，比较好随身佩带报时表或报时钟，及时提醒，避免因遗忘而造成时间延长。现在流行的二步法（Polymer）敏感性很高，要求一抗孵育的时间不是传统的1小时，而是30分钟，因此，要根据染色结果进行调整。 

（3）DAB变质和显色时间太长：DAB比较好现用现配，如有沉渣应进行过滤后再用。配制好的DAB不应存放时间太长，因为在没有酶的情况下，过氧化氢也会游离出氧原子与DAB产生反应而降低DAB的效力，未用完的DAB存放在冰箱里几天后再用这种似乎节约的办法是不可取的。DAB的显色比较好在显微镜下监控，达到理想的染色程度时立即终止反应。但是当染**太多时或用染色机时，这样做似乎不现实，但至少应对一些新的或少用的抗体显色时进行监控，避免显色时间过长。

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关于免疫组化，抗体和抗原之间的结合具有高度的特异性，免疫组织化学正是利用了这一原理。先将组织或细胞中的某种化学物质提取出来，以此作为抗原或半抗原，通过免疫动物后获得特异性的抗体，再以此抗体去探测组织或细胞中的同类的抗原物质。由于抗原与抗体的复合物是无色的，因此还必须借助于组织化学的方法将抗原抗体结合的部位显示出来，以其达到对组织或细胞中的未知抗原进行定性，定位或定量的研究。南京英瀚斯生物科技有限公司有设计免疫组化的实验哦！如果您对此有希望了解更多，可以与我们联系！

免疫组化的特点：

1）特异性强。免疫学的基本原理决定抗原与抗体之间的结合具有高度特异性，因此，免疫组化从理论上讲也是组织细胞中抗原的特定显示，如角蛋白（keratin）显示上皮成分，LCA显示淋巴细胞成分。只有当组织细胞中存在交叉抗原时，才会出现交叉反应。

2）敏感性高。在应用免疫组化的起始阶段，由于技术上的限制，只有直接法、间接法等敏感性不高的技术，那时的抗体只能稀释几倍、几十倍；现在由于ABC法或SP三步法的出现，使抗体稀释上千倍、上万倍甚至上亿倍仍可在组织细胞中与抗原结合，这样高敏感性的抗体抗原反应，使免疫组化方法越来越方便地应用于常规病理诊断工作。

3）定位准确、形态与功能相结合。该技术通过抗原抗体反应及呈色反应，可在组织和细胞中进行抗原的准确定位，因而可同时对不同抗原在同一组织或细胞中进行定位观察，这样就可以进行形态与功能相结合的研究，对病理学领域开展深入研究是十分有意义的。

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免疫组化实验注意事项总结：

Ø本实验室所用切片一般是石蜡切片。

Ø烘片：使蜡片水分蒸发，石蜡软化，组织切片牢固贴在玻片上；烘片至跟烘片前透明度有差异。

Ø抗原修复时，使片子始终浸没在修复液中，液体不能干。

Ø一抗孵育在37度培养箱，湿盒放置1h，省时间和结合效果好，不要超过1h，容易过染。

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Ø二抗使用：两个二抗放大信号或一个二抗；若抗体信号强，可不用放大信号，尽量增大信噪比。

Ø10XDAB在常温溶解，尽可能现用现配，放于4度储存时间久了效果不佳。

Ø复水和脱水时所用的梯度酒精不可混用，要区分开。

Ø加抗体和显色液时，都要将片子甩干，在半干半湿的状态下再加，不然容易造成溶液的二次稀释。

Ø整个操作过程中在显色之前，一定不能干片。 免疫组化失败的原因？山西做得好的免疫组化检测

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免疫组化原理及实验步骤——实验外包。众所周知，抗体与抗原之间的结合具有高度的特异性。免疫组化正是利用这一特性，即先将组织或细胞中的某些化学物质提取出来，以其作为抗原或半抗原去免疫实验动物，制备特异性抗体，再用这种抗体（第1抗体）作为抗原去免疫动物制备第二抗体，并用某种酶（常用辣根过氧化物酶）或生物素等处理后再与前述抗原成分结合，形成抗原 - 一抗 - 二抗复合物，将抗原放大，由于抗体与抗原结合后形成的免疫复合物是无色的，因此，还必须借助于组织化学方法将抗原抗体反应部位显示出来。通过抗原抗体反应及呈色反应，显示细胞或组织中的化学成分，在显微镜下可清晰看见细胞内发生的抗原抗体反应产物，从而能够在细胞或组织原位确定某些化学成分的分布、含量。山西做得好的免疫组化检测