支链PEI转染试剂残留检测方法

瞬时转染方法：1.接种细胞：转染前一晚，用胶原酶（WORTHINGTONG公司LS004196)消化细胞并计数（不建议用胰酶）。调整细胞浓度，将细胞铺入细胞培养的器皿，每个孔置入的细胞量应能使转染时细胞汇合度达到70~80%。2.准备DNA-PEI复合物：DNA、PEI试剂和稀释剂在进行以下步骤前需先使其升至室温。，用Opti-MEMITM（Invitrogen）或其他适合的无蛋白培养基稀释适量DNA。用同样的培养基稀释PEI试剂。每1μgDNA需用1.5-5μL线性PEI转染试剂。一边轻轻涡旋装有DNA溶液的试管，一边将稀释的线性PEI转染试剂滴加至试管中（注意：请勿颠倒添加顺序）。充分混匀后，室温静置10~25min以形成DNA-PEI复合物。当溶液体积较大时，请用圆底聚丙烯管，例如NEST5mL/14mL离心管。3.转染细胞：直接向每个孔中加入DNA-PEI复合物并轻轻涡旋培养板/培养皿。在无血清条件下转染时，去除生长培养基，替换成无血清培养基，然后滴DNA-PEI复合物。转染1.5h后，添加½体积的包含30%血清的生长培养基。4.孵育细胞和分析结果：在CO2培养箱中37℃下孵育细胞至可以分析检测。转染后5h即可检测到转入基因的表达。请自行确定适合检测时间。如想申请试用装，请关注公众号：Mine-bio，回复“申请PEI”，即可参加！哪个品牌的PEI转染试剂比较好？支链PEI转染试剂残留检测方法

Transporter 5转染试剂是一种非GMP等级的即用型线性聚乙烯亚胺（PEI转染试剂）溶液，由PEI MAX配置而成，采用0.1um PES无菌过滤器，完全消除支原体污染风险。Transporter 5将DNA缩聚成带正电荷的复合物，这些复合物很容易通过内吞作用进入细胞，并且Transporter 5-DNA 复合物能很好地抵御溶酶体的降解作用，有效提高转染效率。适用于工艺开发、临床前和早期临床研究，可无缝过渡到MAXgene GMP用于商业化生产。Transporter 5转染试剂能高效地将DNA转染入HEK-293、CHO、COS、HELA、昆虫（SF9、SF21） 等真核细胞系，可作用于大到135,000个核苷酸的质粒，所以较大的质粒也可以成功地转染。 Transporter 5可节省试剂准备时间，加快项目进度。经过严格的性能检测，确保品质，在新药研发过程中是一款快速、重复性好、可用于批量产的转染试剂。产品特点：非GMP，研究级PEI转染试剂溶液；高转染效率；无缝过渡到MAXgene GMP；易放大，可预测产量；用于工艺开发，临床前和早期临床研究。RNAPEI转染试剂病毒产量用PEI转染试剂时出现沉淀什么原因呢?

对于某些类型的细胞如HEK-293、HEK293T、NIH/3T3和COS细胞，在转染前两天铺板可显著提高转入基因的表达水平。如果选择转染前两天铺板，可适当降低铺板密度，以确保转染时细胞的汇合度仍为70~80%。2.对于接触抑制敏感的细胞，可适当降低铺板密度。3.即使在有蛋白（如10%的血清）存在的情况下，DNA-PEI复合物仍能转染细胞，但是DNA-PEI复合物必须在无蛋白存在的条件下形成。我们推荐使用Opti-MEMITM培养基以达到宜转染效率。其他的无蛋白培养基则需测试与线性PEI转染试剂的兼容性。4.对大多数细胞来而言，每1μgDNA使用3.0μLPEIMAX转染试剂都能获得较高转染效率。使用者也可尝试每1μgDNA使用1.5~4μL体积线性PEIMAX转染试剂进行优化。更多产品信息，欢迎咨询上海曼博生物！

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PEIMAX粉末配置方法：1)将1gPEIMAX40K放入盛有900mL水的玻璃烧杯中；2)放入搅拌转子，放置于磁力搅拌器上，设置搅拌程序以形成一个较小的漩涡；3)等待PEIMAX40K完全溶解，通常需要5分钟左右；4)用25mL塑料移液管加入1N氢氧化钠滴定至pH6.9~7.1；5)如果不小心超过7.1，则使用1N的盐酸和新的塑料移液管将pH重新滴定至6.9~7.1；6)将溶液转移到1L玻璃量筒中，加入水定容至1L；7)用无菌真空过滤膜过滤配制的转染试剂溶液；8)按需分装，4°C储存（切记不可冷冻）；注：未经配制的粉末有效期为2年。配置成液体后分装在合适的瓶子中，并且保存在4℃的转染试剂将可在6个月之内保持性能。如jin用于蛋白定性研究，分装的转染试剂可延长有效使用期至1年。如想申请PEI试用装，请关注我们的公众号：Mine-bio，回复关键词“PEI申请”，即可参加！PEI转染试剂对复合物孵化的时间是有要求的，一般建议5~20分钟之间.RNAPEI转染试剂怎么样

用PEI转染时，一般和DNA的比例是多少呢?支链PEI转染试剂残留检测方法

细胞转染实验是生物医学实验室中常规的研究手段，目的是把外源基因、蛋白或者小分子导入到靶细胞内。目前主要有三种主流方法：生物转染，物理转染和化学转染。其中生物转染主要是利用病毒等微生物作为基因导入载体，以慢病毒、腺病毒和腺相关病毒等常见，其侵染效率可以达到90%以上，但常因安全性等问题，很多实验室对其敬而远之。物理转染主要包括显微注射、电穿孔和基因，无论哪一种都需要特定的设备，且一分钱一分货，性能好的价格也都很性感。上海曼博生物是Polysciences官方授权du jia代理商，更多关于转染试剂相关问题，欢迎咨询上海曼博生物！也欢迎关注我们的公众号：Mine-bio查看更多技术文章！回复关键词“PEI申请”可申请试用装！支链PEI转染试剂残留检测方法