国内深度测序分析原理

时间:2023年06月26日 来源:

全基因组测序要注意的事项:全基因组测序是对未知基因组序列的物种进行个体的基因组测序。技术路线:提取基因组DNA,然后随机打断,电泳回收所需长度的DNA的片段(0.2~5Kb),加上接头,进行DNA簇(Cluster)制备,后利用Paired-End(Solexa)或者Mate-Pair(SOLiD)的方法对插入片段进行测序。然后对测得的序列组装成Contig,通过Paired-End的距离可进一步组装成Scaffold,进而可组装成染色体等。组装效果与测序深度与覆盖度、测序质量等有关。常用的组装有:SOAPdenovo、Trimity、Abyss等。测序深度(Sequencingdepth)是指测序得到的碱基总量(bp)与基因组大小的比值,它是评价测序量的指标之一。测序深度与基因组覆盖度之间是一个正相关的关系,测序带来的错误率或假阳性结果会随着测序深度的提升而下降。测序的个体,如果采用的是双末端或Mate-Pair方案,当测序深度在50X~100X以上时,基因组覆盖度和测序错误率控制均得以保证,后续序列组装成染色体才能变得更容易与准确。



对病毒的全基因组进行测序主要是通过非特异性扩增+克隆结合sanger测序来完成。国内深度测序分析原理

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二代测序应用的患者类型的推荐:共识明确指出了二代测序应用的患者类型及使用的时机的意见:对于神经系统急性传染/血流传染/呼吸道传染患者,3天是二代测序使用的时机,在传统方法(常规的生化检查和培养)3天未报阳性且经验性调整无效时,强烈推荐二代测序检测;对疑似病毒传染患者,包括:疑似神经系统病毒传染和病毒性肺炎且病情持续进展的患者,若完善传统PCR检测后依然未获得明确的病原学证据时,强烈推荐二代测序检测。对于疑似局灶性传染患者完成常规的生物化学、培养或PCR检测后,若未能获取病原学诊断结果,推荐将二代测序作为检测方法。而对于怀疑继发性血流传染患者:在原发传染灶的病原学检测为阴性或因各种因素无法送检合适标本的情况下,可考虑将血标本的二代测序检测作为二线检测。安徽全基因组病毒测序上哪找全基因组测序覆盖面广。

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能实现对病毒的全基因组进行测序的技术手段:早期在高通量测序技术普及之前,对病毒的全基因组进行测序是通过非特异性扩增+克隆结合sanger测序来完成的。当物种有了参考的序列之后,可以通过特异性扩增+sanger测序获得全基因组序列。Sanger测序准确度高,读长很长,但与此同时,扩增和克隆工作费时费力,由于流程繁琐,加上快速变异导致引物无法通用,该方法对于大量基因组的测序工作而言,可操作性不强,这对于研究者一直是一个困扰。高通量测序技术正式启用之后,研究者可以将样品处理至标准浓度和体积后进行测序和分析,减少了工作量,增加了成功率。探普生物进行了大量有针对性的研发和测试,开发了全套的实验和分析流程用于对病毒的全基因组进行测序,该流程自运行以来广受研究者们好评。




一直以来,病毒基因组测序都是疾病诊断、流行病学调查和宿主-病原关系研究的重要手段。病毒的全基因组测序以及对应的生物信息学分析方法是研究病毒进化、毒力因子变异、疫病爆发之间的关系、疫病传播途径、不同遗传变异的分布模式、疫病发生地理区域的基础。与传统Sanger测序相比,NGS技术的发展使得一个小的研究小组可以拥有大量病毒株的全基因组序列,测序成本也在逐步降低。由于NGS产生的数据量非常庞大,其序列拼接难度也随之增加。而且对于低浓度高复杂度的样本,研究者除了PCR外别无他法。而PCR方法往往具有偏好性,丢失的片段将为序列组装带来非常高的失败率。对于完全未知的样本,无法通过PCR进行富集,要鉴定其种类需要调用各种方法,逐个尝试,工作量之大,其效率之低,使得一个新的研究方法的出现及其必要。


目前对病毒溯源分型主要检测手段就是高通量测序技术。

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病毒全基因组测序定:探普生物对病毒的全基因组进行测序的实验基于二代测序技术。样本经过核酸纯化-文库构建-生物信息学分析这3大基本流程后转换成了序列数据。先,在核酸纯化环节,探普提供专门针对性的核酸纯化样本指南,以提高目的物种的核酸纯度和得率,与此同时探普生物也提供核酸纯化服务。第二,文库构建环节,样本的核酸具备浓度低,总量少的特点。探普生物专门针对这一点开发了超微量核酸文库构建,可以将0.01ng/μl甚至更低浓度的核酸构建成测序文库。第三,生物信息学分析环节。生存环境和状态决定了对病毒的全基因组进行测序的下机数据一般都伴随大量的宿主和其他微生物的数据。探普生物基于该特点,优化了自有数据库,搭载了专门用的的生物信息学分析流程,可处理复杂背景下的目标物种序列。



全基因组测序能检测个体基因组中的全部遗传信息,准确性高。二代测序分析技术

分析不同大小和不同样品类型的UViGs对于探索病毒基因组序列空白是有价值的。国内深度测序分析原理

病毒基因组测序包括完成图测序、扫描图测序和重测序三个层面,通过二代/三代测序平台,获得病毒的基因组的序列信息,并在结构基因组学、比较基因组学层面通过差异分析、同源基因分析、共线性分析、物种进化分析等手段探究病毒的毒力系统、基因组的进化与演变历程等。对疑似传染标本采集提取后直接进行高通量测序,通过病原微生物数据库比对和智能化算法分析,获得疑似致病微生物种属信息,并提供全方面深入的报告,为疑难危重传染提供快速准确诊断依据,促进药物的合理应用。



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上海探普生物科技有限公司是以病毒测序,病毒全基因组测序,病毒宏基因组测序,未知病原鉴定研发、生产、销售、服务为一体的从事生物科技专业领域内技术开发、技术转让、技术咨询、技术服务,化工原料及产品(除危险化学品、监控化学品、烟花爆竹、易制毒化学品),实验室设备,计算机、软件及辅助设备,电子产品销售,计算机软件开发及维护,计算机信息系统集成服务等。企业,公司成立于2018-10-30,地址在放鹤路1088号6号楼307。至创始至今,公司已经颇有规模。本公司主要从事病毒测序,病毒全基因组测序,病毒宏基因组测序,未知病原鉴定领域内的病毒测序,病毒全基因组测序,病毒宏基因组测序,未知病原鉴定等产品的研究开发。拥有一支研发能力强、成果丰硕的技术队伍。公司先后与行业上游与下游企业建立了长期合作的关系。探普以符合行业标准的产品质量为目标,并始终如一地坚守这一原则,正是这种高标准的自我要求,产品获得市场及消费者的高度认可。上海探普生物科技有限公司以先进工艺为基础、以产品质量为根本、以技术创新为动力,开发并推出多项具有竞争力的病毒测序,病毒全基因组测序,病毒宏基因组测序,未知病原鉴定产品,确保了在病毒测序,病毒全基因组测序,病毒宏基因组测序,未知病原鉴定市场的优势。

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