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扫描电镜细胞内部结构冷冻割断法 该方法简便,结构清晰,已得到普遍应用。其操作方法如下: 1) 取材和固定:为了使细胞结构清晰,不被过多的血细胞污染,可在取材前用灌注法冲洗。即先将动物麻醉,经腹主动脉注入生理盐水或低分子量的右,切开下腔静脉放血,至无血色为止。然后迅速取材,将样品修成1mm×1mm×5mm大小,投入1%锇酸溶液中固定1小时,用1/15M磷酸缓冲液(pH7.4)清洗两次,每次10分钟。 2) 二甲基亚砜浸泡:将样品依次放入25%、50%二甲基亚砜溶液中,各浸泡30分钟。 3) 割断:用TF—1型冷冻割断装置进行割断。然后将割断后的样品放到50%二甲基亚砜中,等融化后再用1/15M磷酸缓冲液浸洗,每次10分钟,换液5次。 4) 软化及后固定:将样品放入0.1%锇酸中软化,温度20℃,时间48~72小时。然后用1%锇酸固定1小时,双蒸水浸洗1小时,换液几次,需彻底清洗干净。 5) 导电染色:将样品放入2%丹宁酸中2小时(或过夜),以双蒸水清洗1小时,换液几次。双蒸水清洗1小时。 6) 脱水、干燥及镀膜:按常规方法进行。扫描电镜这部分主要由电子枪、电磁透镜、扫描线圈、样品室组成。四川整体扫描电镜哪家效果好
扫描电镜实验方法原理1. 生物样品的精细结构易遭破坏。因此在进行制样处理和进行电镜观察前必需进行固定。以使其能较为大限度地保持其生活时的形态。而采用水溶性、低表面张力的有机溶液如乙醇等对样品进行梯度脱水,也是为了在对样品进行干燥处理时尽量减少由表面张力引起的其自然形态的变化。 2. 目前采用较为多、效果较为好的方法是临界点干燥法。其原理是在一装有溶液的密闭容器中,随着温度的升高,蒸发速率加快,气相密度增加。液相密度下降。当温度增调到某一定值时,气、液二相密度相等,界面消失,表面张力也就不存在了。此时的温度及压力即称为临界点。将生物样品用临界点较低的物质置换出内部的脱水剂进行干燥,可以完全消除表面张力对样品结构的破坏。 目前用得较为多的置换剂是二氧化碳。由于二氧化碳与乙醇的互溶性不好,因此样品经乙醇分级脱水后还需用与这两种物质都能互溶的「媒介液」醋酸戊脂置换乙醇。湖南组织扫描电镜价格1970年他发表了用扫描透射电镜拍摄的铀中的铀原子和钍原子像,这使SEM又进展到一个新的领域。
扫描电镜由电子器发射出来的电子束,在加速电压的作用下,经过磁透镜系统汇聚,形成直径为5nm,经过二至三个电磁透镜所组成的电子光学系统,电子束会聚成一个细的电子束聚焦在样品表面。在末级透镜上边装有扫描线圈,在它的作用下使电子束在样品表面扫描。 由于高能电子束与样品物质的交互作用,结果产生了各种信息:二次电子、背反射电子、吸收电子、X射线、俄歇电子、阴极发光和透射电子等。这些信号被相应的接收器接收,经放大后送到显像管的栅极上,调制显像管的亮度。由于经过扫描线圈上的电流是与显像管相应的亮度一一对应,也就是说,电子束打到样品上一点时,在显像管荧光屏上就出现一个亮点。 扫描电镜就是这样采用逐点成像的方法,把样品表面不同的特征,按顺序,成比例地转换为视频信号,完成一帧图像,从而使我们在荧光屏上观察到样品表面的各种特征图像。
扫描电镜样本临界点干燥法 临界点干燥法是利用物质在临界状态时,其表面张力等于零的特性,使样品的液体完全汽化,并以气体方式排掉,来达到完全干燥的目的。这样就可以避免表面张力的影响,较好地保存样品的微细结构。此法操作较为方便,所用的时间也不算长,一般约2~3小时即可完成,所以是较为为常用的干燥方法。但用此法, 需要特殊仪器设备。临界点干燥是在临界点干燥仪中进行的,操作步骤如下: a.固定、脱水:按常规方法进行。如样品是用乙醇脱水的,在脱水至100%后,要用纯acetone置换15~20分钟。 b.转入中间液:由纯acetone转入中间液醋酸异戊酯中,时间约15~30分钟。 c.移至样品室:将样品从醋酸异戊酯中取出,放入样品盒,然后移至临界点干燥仪的样品室内,盖上盖并拧紧以防漏气。 d.用液体二氧化碳置换醋酸异戊酯:在达到临界状态(31℃, 72.8大气压)后,将温度再升高10℃,使液体二氧化碳气化,然后打开放气阀门,逐渐排出气体,样品即完全干燥。 扫描电镜观察生物试样:由于电子照射面发生试样的损伤和污染程度很小,这一点对观察一些生物试样特别重要!
扫描电镜检测块状试样制备 导电性材料:主要是指金属,一些矿物和半导体材料也具有一定的导电性。这类材料的试样制备较为为简单。只要使试样大小不得超过仪器规定(如试样直径较为大为φ25mm,较为厚不超过20mm等),然后用双面胶带粘在载物盘,再用导电银浆连通试样与载物盘(以确保导电良好),等银浆干了(一般用台灯近距离照射10分钟,如果银浆没干透的话,在蒸金抽真空时将会不断挥发出气体,使得抽真空过程变慢)之后就可放到扫描电镜中直接进行观察。 非导电性材料:试样的制备也比较简单,基本可以像导电性块状材料试样的制备一样,但是要注意的是在涂导电银浆的时候一定要从载物盘一直连到块状材料试样的上表面,因为观察时候电子束是直接照射在试样的上表面的。在扫描电子显微镜中,成象的信息主要是电子信息。四川整体扫描电镜哪家效果好
扫描电镜可动范围大,这对观察不规则形状试样的各个区域细节带来极大的方便。四川整体扫描电镜哪家效果好
扫描电镜进行动态观察。在扫描电子显微镜中,成象的信息主要是电子信息。根据近代的电子工业技术水平,即使高速变化的电子信息,也能毫不困难的及时接收、处理和储存,故可进行一些动态过程的观察。如果在样品室内装有加热、冷却、弯曲、拉伸和离子刻蚀等附件,则可以通过电视装置,观察相变、断裂等动态的变化过程。从试样表面形貌获得多方面资料。在扫描电子显微镜中,不*可以利用入射电子和试样相互作用产生各种信息来成象,而且可以通过信号处理方法,获得多种图象的特殊显示方法,还可以从试样的表面形貌获得多方面资料。因为扫描电子象不是同时记录的,它是分解为近百万个逐次依此记录构成的,因而使得扫描电子显微镜除了观察表面形貌外,还能进行成分和元素的分析,以及通过电子通道花样进行结晶学分析,选区尺寸可以从10μm到2μm。四川整体扫描电镜哪家效果好
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