嘉兴基因编辑技术脱靶检测评估标准

由于设计的sgRNA会与非靶点DNA序列错配，引入非预期的基因突变，即脱靶效应(Off-targeteffects)。脱靶效应造成了研究中的许多不确定性，这无疑限制了该技术的应用。因此，研究者希望能开发有效的方法来检测脱靶效应。在目前主流的脱靶效应评估方法中，有一种方法为GUIDE-seq，其原理是利用一种短的双链寡聚核苷酸（dsODN）标记CRISPR/Cas诱导的脱靶断裂，然后对标签所在的基因组区域进行高通量测序，通过生物信息学分析从而确定脱靶位点。利用该技术可以在基因组范围内检测CRISPR脱靶效应，从而改变了以往先预测假定脱靶位点再检测的思路；与其他的评估方法相比，GUIDE-seq更精确、更灵敏。高精度脱靶检测，推荐唯可生物，实验实力强，专业性高，检测效率高，结果准确率高。嘉兴基因编辑技术脱靶检测评估标准

诱导多能干细胞来源的细胞产品。诱导多能干细胞（inducedpluripotentstemcell，iPS）自身具有致瘤性风险，在体内可形成畸胎瘤，整合病毒载体的使用和诱导多能性可能增加iPS细胞插入致突变性和致性的风险。因此，应在shou次临床试验前完成致瘤性试验。若设计科学合理，能够满足评价要求，也可在持续时间足够长的毒性研究中评估致瘤性风险。体内致瘤性试验建议采用掺入未分化iPS细胞的细胞产品作为阳性对照，以确认实验系统的灵敏度。如果iPS细胞设计了机制以降低致瘤风险，应在体内试验中确认/验证此类机制的功能 定量脱靶检测通过对DSB的标记实现了全基因组无偏脱靶检测，如IDLVs、BLESS、GUIDE-seq技术等。

对于CAR修饰的免疫细胞，应采用多种体外方法评估其胞外抗原识别区的脱靶风险。TCR修饰免疫细胞的脱靶毒性可通过评估TCR与人体自身抗原肽的交叉识别能力来评估。首先，应采用体外试验测定TCR修饰的免疫细胞与人自身抗原肽-HLA（与递呈靶抗原肽的HLA等位基因相同）复合物的亲和力，并说明抗原肽的选择依据及选择范围。此外，还应研究其他相关或不相关的蛋白中是否含有靶抗原肽序列。如果TCR与人自身抗原肽有交叉反应可能，应确定靶抗原肽的较小识别基序（motif），并采用计算机预测分析评估交叉反应性。如果计算机预测可识别出具有潜在交叉反应性的抗原肽，应在体外测定TCR修饰免疫细胞对表达相应蛋白或递呈相应抗原肽的的细胞的识别能力。如果不能排除交叉反应性，应基于含有潜在交叉反应性抗原肽的蛋白的表达模式以及TCR与潜在交叉反应性抗原肽的亲和力来进行风险评估。为获得TCR与其他等位HLA潜在交叉反应性的信息，应进行充分的HLA交叉反应性筛选。

基因重排或重组。当基因zhiliao产品所用载体及其携带的基因发生复制时，可能出现非zhiliao目的非预期的基因表达或改变，或者与相应野生型或辅助病毒互补后产生回复突变或意外复制或形成6新的病毒。免疫原性。由于基因zhiliao产品在体内的持续暴露或者需要多次给药等情况，机体可能产生针对基因zhiliao载体或编码的作用因子的免疫应答。由于基因zhiliao产品在靶细胞或组织中的表达时间、分布范围或表达强度等差异，机体免疫应答的后果可能从不具有临床意义的一过性的免疫反应，到针对靶细胞或组织的免疫攻击，甚至产生严重危及生命的不良事件。脱靶检测报告，推荐唯可生物，实验实力强，专业性高，检测效率高，结果准确率高。

使用CRISPR/Cas9、ZFNs和TALENs等设计核酸酶进行基因组编辑，可以将遗传物质定向导入哺乳动物基因组的特定位点。然而，可能会出现非预期的靶上和靶外基因组修饰，这可能导致基因组不稳定，并破坏正常基因的功能，从而可能导致临床前和临床研究中的安全问题。基因编辑目前的脱靶分析技术主要依赖于生物信息学预测和全基因组脱靶检测技术。这些预测缺乏可靠性，因为它们只涵盖了潜在基因组改变的一小部分。而频率低于0.5%的脱靶突变大多无法被全基因组脱靶检测技术检测到。我们是开发用于全基因组靶向/非靶向分析的无偏分析的先驱。靶向基因组编辑唯可生物为基因编辑安全性评估提供多方面的PCR和基于NGS的分析。我们的多功能且经济高效的检测方法可检测靶向和非靶向基因组改变。我们先进的分析技术与强大的内部生物信息学体系相结合，可靠地量化了预期的靶向整合与非预期结果(如易位和INDEL)之间的比率。种子基因脱靶检测机构推荐唯可。宁波基因疗法脱靶检测guide-sequence

脱靶检测方法，推荐唯可生物，实验实力强，专业性高，检测效率高，结果准确率高。嘉兴基因编辑技术脱靶检测评估标准

细胞经基因修饰后会改变其生物学特性，同时也会带来新的安全性风险，如基因编辑脱靶风险、载体插入突变风险、载体重组风险、表达的转基因产物的风险等。在制定非临床研究计划时，除参考《细胞zhilliao产品研究与评价技术指导原则》（试行）中的对细胞zhilliao产品的一般要求外，还应具体问题具体分析，基于产品特点和目前已有的科学认知，结合拟定适应症、患者人群、给药途径和给yaofang案等方面的考虑，科学合理的设计和实施非临床研究，充分表征产品的药理学、毒理学和药代动力学特征。在进行获益风险评估时，还应重点关注由非临床向临床过渡时非临床研究的局限性和风险预测的不确定性。嘉兴基因编辑技术脱靶检测评估标准