上海Co IP免疫沉淀磁珠多少钱
时间：2024年06月04日
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RIP 技术的原理（RNA Binding Protein Immunoprecipitation Assay，RNA 结合蛋白免疫沉淀）主要是运用针对目标蛋白的抗体把相应的RNA-蛋白复合物沉淀下来，经过分离纯化就可以对结合在复合物上的RNA 进行q-PCR验证或者测序分析。
RIP 是研究细胞内RNA 与蛋白结合情况的技术，是了解转录后调控网络动态过程的有力工具。RIP可以看成是普遍使用的染色质免疫沉淀ChIP技术的类似应用，但由于研究对象是RNA-蛋白复合物而不是DNA-蛋白复合物，RIP实验的优化条件与ChIP实验不太相同，如：RIP反应体系中的试剂和抗体不能含有RNA酶，抗体需经RIP实验验证等等。
免疫沉淀技术是什么？上海Co IP免疫沉淀磁珠多少钱
免疫沉淀技术（Immunoprecipitation，简称IP）是一种生物化学方法，它利用特异性抗体对抗原进行亲和纯化。在含有目的抗原的细胞裂解液中加入特定的抗体以及Protein A/G-Beads（预先将Protein A/G固定结合在磁珠上），根据抗原与抗体、Protein A/G与抗体的Fc的特异性，形成“抗原-抗体-Protein A/G-Beads”复合物，清洗离心后去除溶液中未结合的杂蛋白，检测是否存在目的蛋白。
免疫沉淀技术常用于从细胞或组织裂解物中分离用于免疫印迹检测或其他检测技术的蛋白和其他生物分子。它的目标是分离足够用于Western Blot或其他检测方法检测的蛋白质。
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染色质免疫共沉淀（Chromatinimmunoprecipitation，ChIP）技术是目前公认的研究此相互作用的选择，是真核生物基因表达机制研究中不可或缺的技术之一。
它的基本原理是在活细胞状态下，固定蛋白质-DNA（染色质）复合物，并将其切断为一定长度范围内的染色质小片段，然后通过免疫学方法（抗体亲和）沉淀此复合体，特异性地富集目的蛋白结合的 DNA，通过对目的片段的纯化与后期检测，从而获得蛋白质与 DNA 相互作用的信息。
这项技术通过蛋白质与DNA互作来分析目标基因活性以及已知蛋白质的靶基因，被广泛应用于体内转录调控因子与靶基因启动子上特异核苷酸序列结合方面的研究。该技术常与DNA芯片和分子克隆技术相结合。
ChIP（染色质免疫沉淀）实验是一种强大的技术，用于研究蛋白质与DNA之间的相互作用，尤其是在转录调控、DNA修复、复制以及表观遗传学领域。然而，像所有实验技术一样，ChIP实验也有其优点和缺点。
ChIP实验的优点：
1. 体内反应的反映：ChIP提供了一种在体内研究蛋白质与DNA相互作用的方法，能够真实、完整地反映结合在DNA序列上的靶蛋白的调控信息。
2. 全基因组覆盖：ChIP技术可以覆盖整个基因组，提供关于蛋白质-DNA相互作用的视图。
3. 适用于多种蛋白质：ChIP可以用来研究组蛋白修饰、转录因子以及其他DNA结合蛋白。
ChIP实验的缺点：
1. 实验步骤繁琐。
2. 需要大量起始材料：ChIP实验通常需要大量的细胞或组织作为起始材料。
3. 交联的影响：使用交联剂可能会改变蛋白质的结构，从而影响抗体的识别和蛋白质-DNA的相互作用。
4. 染色质碎裂的分辨率：染色质碎裂的效率和分辨率直接影响ChIP的准确性，需要优化以获得结果。
5. 抗体质量：抗体的质量对实验结果至关重要，但高质量、特异性强的抗体可能难以获得或成本较高。
免疫沉淀技术ChIP的原理是什么？
真核生物的基因组 DNA 以染色质（Chromatin）的形式存在。因此，研究蛋白质与 DNA 在染色质环境中的相互作用是阐明真核生物基因表达机制的基本途径，而染色质免疫共沉淀（Chromatinimmunoprecipitation，ChIP）技术是目前公认的研究此相互作用的选择，是真核生物基因表达机制研究中不可或缺的技术之一。
它的基本原理是在活细胞状态下，固定蛋白质-DNA（染色质）复合物，并将其切断为一定长度范围内的染色质小片段，然后通过免疫学方法（抗体亲和）沉淀此复合体，特异性地富集目的蛋白结合的 DNA，通过对目的片段的纯化与后期检测，从而获得蛋白质与 DNA 相互作用的信息。
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Co-IP的实验步骤：
1. 细胞裂解：首先，细胞或组织被裂解，释放其中的蛋白质。
2. 抗体结合：然后，将特异性抗体（针对已知蛋白质之一的抗体）加入到裂解物中。这些抗体会特异性地结合到目标蛋白（诱饵蛋白）上。
3. 免疫复合物形成：抗体与目标蛋白结合后，形成免疫复合物。
4. 沉淀：接着，使用蛋白A或蛋白G结合的珠子（如琼脂糖或磁性珠子）来捕获免疫复合物。蛋白A或蛋白G能够与抗体的Fc部分结合，从而拉下抗体以及与之结合的目标蛋白和任何相关的相互作用蛋白。
5. 洗涤：捕获的免疫复合物被洗涤以去除未特异性结合的蛋白质。
6. 洗脱和分析：免疫复合物被洗脱并进行进一步的分析，如Western blot（WB）或质谱分析，以鉴定相互作用的蛋白质。
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