广州anti Flag免疫沉淀磁珠哪个公司好用
时间：2024年06月19日
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免疫沉淀ChIP实验中磁珠还是琼脂糖珠的选择取决于客户实验情况。
琼脂糖珠海绵状的结构 (直径 50-150 μm) 可以结合抗体 (继而结合靶蛋白) ，它能够直接高效、快速结合抗体，而不需借助特殊的专业设备。琼脂糖珠呈多孔结构，这使得它们拥有更大的表面积可与蛋白质相互接触，具有更高的结合载量。
与琼脂糖珠不同，磁珠是固体，抗体的结合限于磁珠的表面。磁珠 (直径 1-4 μm) 明显小于琼脂糖珠 ，尽管磁珠没有多孔中心增加结合能力，但每体积的磁珠数量比琼脂糖珠多，使磁珠拥有足够的抗体结合表面积满足高容量的抗体结合。
简而言之，琼脂糖珠的结合能力较强，而磁珠在得率，可重复性以及自动化方面有明显的优势。
免疫沉淀技术RIP的原理是什么？广州anti Flag免疫沉淀磁珠哪个公司好用
真核生物的基因组 DNA 以染色质（Chromatin）的形式存在。因此，研究蛋白质与 DNA 在染色质环境中的相互作用是阐明真核生物基因表达机制的基本途径，而染色质免疫共沉淀（Chromatinimmunoprecipitation，ChIP）技术是目前公认的研究此相互作用的选择，是真核生物基因表达机制研究中不可或缺的技术之一。
它的基本原理是在活细胞状态下，固定蛋白质-DNA（染色质）复合物，并将其切断为一定长度范围内的染色质小片段，然后通过免疫学方法（抗体亲和）沉淀此复合体，特异性地富集目的蛋白结合的 DNA，通过对目的片段的纯化与后期检测，从而获得蛋白质与 DNA 相互作用的信息。
苏州Co IP免疫沉淀实验视频免疫沉淀技术的综述。
免疫沉淀技术RIP（RNA Immunoprecipitation，RNA免疫沉淀）是一种用于研究细胞内RNA与蛋白质相互作用的技术。RIP技术可以帮助我们了解转录后调控网络的动态过程，并发现miRNA等非编码RNA的调节靶点。
RIP技术的原理是利用针对特定RNA结合蛋白的抗体，将细胞内的RNA-蛋白质复合物沉淀下来。然后，可以通过分离纯化，对这些复合物中的RNA进行检测，如qPCR验证或测序分析。
表观遗传学和RNA生物学领域对不同RNA作用和功能的关注增加。RNA-蛋白质相互作用能够调控mRNA和非编码RNA的功能。对RNA潜能的这一新认识带动了新方法的发展，使研究人员能够定位 RNA-蛋白质相互作用。
Co-IP（免疫共沉淀）技术主要用于研究蛋白质之间的相互作用，其实验设计如下：
1. 样品准备：Co-IP实验通常有两种，一种是内源性蛋白相互作用验证，一种是非内源性蛋白相互作用验证。内源性相互作用通过质粒共转染的方式将两种蛋白转染至同一细胞内表达；非内源性相互作用则是将含有靶蛋白的组织进行预处理及细胞裂解获得细胞裂解液。
2. 沉淀诱饵蛋白：利用磁珠偶联抗体沉淀诱饵蛋白。在样品中加入磁珠偶联抗体，抗体会与诱饵蛋白结合，利用磁铁将磁珠拉下，同时诱饵蛋白会一起被沉淀出来。
3. SDS-PAGE及WB检测：得到沉淀后，需要验证沉淀中是否存在相互作用蛋白。先利用SDS-PAGE将蛋白复合物分离，随后利用WB检测是否存在靶蛋白。
4. 实验对照设置：为了避免“假阳性”，需要设置正确的对照，包括阴性对照和阳性对照（Input组）。Input组为直接利用抗体对细胞裂解液进行WB检测，验证细胞裂解液中存在蛋白。
5. 结果真实性：确保共沉淀的蛋白是由所加入的抗体沉淀得到的，而并非外源非特异蛋白。使用单克隆抗体有助于避免污染的发生。
免疫沉淀技术IP实验步骤。
Co-IP的实验步骤：
1. 细胞裂解：首先，细胞或组织被裂解，释放其中的蛋白质。
2. 抗体结合：然后，将特异性抗体（针对已知蛋白质之一的抗体）加入到裂解物中。这些抗体会特异性地结合到目标蛋白（诱饵蛋白）上。
3. 免疫复合物形成：抗体与目标蛋白结合后，形成免疫复合物。
4. 沉淀：接着，使用蛋白A或蛋白G结合的珠子（如琼脂糖或磁性珠子）来捕获免疫复合物。蛋白A或蛋白G能够与抗体的Fc部分结合，从而拉下抗体以及与之结合的目标蛋白和任何相关的相互作用蛋白。
5. 洗涤：捕获的免疫复合物被洗涤以去除未特异性结合的蛋白质。
6. 洗脱和分析：免疫复合物被洗脱并进行进一步的分析，如Western blot（WB）或质谱分析，以鉴定相互作用的蛋白质。
免疫沉淀选琼脂糖珠还是磁珠？苏州蛋白免疫沉淀实验原理免疫沉淀技术Co-IP的优缺点是什么？广州anti Flag免疫沉淀磁珠哪个公司好用
免疫沉淀纯化所得抗原量低有多种原因，
A. 纯化所得抗原量低
1. 抗原结合水平低
IP 应用中出现低抗原结合水平的可能原因有很多，结合反应所使用的溶液是重要原因之一。必须使用适合的缓冲液，有特定的pH和盐浓度，可能还需要添加互作所需的辅助因子。IP 或Co-IP 中用于纯化的抗体是影响得率的另一个重要因素。如果抗体本身易失活或与抗原结合微弱，则可能很难找到足够温和的条件，即能产生结合，又能保证在孵育和洗涤过程中结合可以稳定保持。
2. 抗原洗脱水平低
在某些情况下，抗原与抗体或结合蛋白结合之间可能会发生极强的相互作用，传统的洗脱缓冲液无法将其破坏。如果需要使用温和洗脱缓冲液收集功能性抗原，则上述矛盾尤为突出。
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