湖南FabALACTICAIdeS蛋白酶蛋白组学

LC-MS中级分析是一种被大众接受的分析方法，用于快速表征mAb和其他基于IgG的生物制药。它有助于理解多种关键质量属性 （CQA），例如糖基化、氧化和 C 端赖氨酸剪切。这种关于翻译后修饰（PTM）的详细知识是生物制药开发和制造所必需的。Genovis的FabRICATOR HPLC酶色谱柱，可快速进行单克隆抗体的柱上酶切，并产生一致的亚基。该色谱柱含有固定化的FabRICATOR（IdeS）酶，可在铰链下方快速且特异性地消化IgG，产生F（ab'）2和Fc片段，而不会出现任何过度消化的风险。为了减少样品处理并为样品制备提供自动化解决方案，FabRICATOR被共价固定在树脂上，并装在适用于HPLC的PEEK色谱柱硬件中。使用FabRICATOR HPLC色谱柱，只需稍作修改，即可使用标准HPLC-MS装置自动生成抗体亚基。然后，FabRICATOR HPLC色谱柱上消解产生的亚基被捕获在在线连接的反相（RP）色谱柱的柱头上。Genovis的内切糖苷酶 IgGZERO和 GlycINATOR 还可以研究完整的 ADC，但降低复杂性并提高分辨率。湖南FabALACTICAIdeS蛋白酶蛋白组学

Genovis的FabRICATOR是一种半胱氨酸蛋白酶，它对许多不同的物种和IgG亚类都有活性，包括人IgG亚类1-4以及猴子、兔子、大鼠和绵羊IgG的一些亚类。FabRICATOR在铰链下方的单个位点进行消化，生成F(ab’)2和Fc/2子基，可以进一步还原生成Fd’，轻链和F/2子基是必需的。FabRICATOR（IdeS）通过蛋白-蛋白相互作用与目标抗体工作，这说明了它的高特异性。事实上，它在单个位点消化意味着使用FabRICATOR时没有过度消化的风险，其高特异性也意味着相同的消化方案可以作为平台方法应用于许多不同的抗体。FabRICATOR（IdeS）不需要还原条件来获得良好活性，也不需要任何额外的辅助因子，它将在不同生理缓冲中发挥作用。这意味着按照下面的铰链消解，您将生成F(ab’)2和Fc/2片段用于分析或其他应用。青海FabRICATOR ZIdeS蛋白酶抗体酶切可消化精氨酸残基的 C 末端蛋白质，包括难以与其他酶消化的 Arg-Pro 键。

上海倍笃生物科技有限公司（简称“倍笃生物”），由中国科学院及生物医药产业界人士，于2018年1月共同创立。公司代理多个品牌的仪器、试剂及耗材（如Genovis的IdeS酶），遵守相关法规要求，如cGMP规范、ISO13485质量管理体系认证等，致力于为诊断领域如分子诊断及病原微生物检测研发等，药物研发领域如细胞基因药物、核酸药物、抗体药物、干细胞及外泌体研究等客户提供合规、高质量物料及专业服务，以期与客户共同协作，加快研发及生产进度，为客户提供更多价值。

与IdeS不同，在蛋白质zhiliao药物的质量控制过程中，详细分析和识别质量属性非常重要。对于具有柔性连接子的融合蛋白疗法，这包括确认连接蛋白的质量以及蛋白质接头的质量。使用 Genovis的GlySERIAS 的连接子酶切可以通过分离连接的蛋白质结构域来帮助这种质量控制。然而，连接子中的大量甘氨酸残基提供了酶的许多潜在消化位点，导致连接子内多个位点同时水解。消化的产物通常由连接蛋白的几种变体组成，并保留不同程度的连接子。虽然观察到的异质性通常不会对蛋白质亚基的详细表征产生负面影响，但有助于直接表征连接子，但有时需要更均匀的消化产物来详细分析单个蛋白质结构域。GingisKHAN用于LC-MS表征基于抗体的生物药研究。

与IdeS不同，Romiplostim 由四个相同的血小板生成素 （TPO） 受体结合肽和一个 Fc 片段组成，通过柔性聚甘氨酸序列连接在一起。与度拉糖肽类似，用 Genovis的GlySERIAS Immobilized 在 37°C 下过夜，或用 GlySERIAS 冻干 1 小时并在 37°C 下过夜消化该蛋白质。 链间二硫键被还原，以便于通过反相LC-MS进行以下分析。与度拉糖肽的观察结果类似，用固定化酶消化产生均质的 Fc/2，剩下一个连接子残基，此处为甘氨酸残基。这有助于识别专门位于Fc区域的修改。用冻干酶消化 1 小时得到 Fc/2，剩余 4 个甘氨酸残基和少量的 Fc/2 仍与一个 TPO 肽连接。另一方面，这使得研究 Fc/2 和第yi个肽之间的连接区域成为可能，而不会受到第二个肽的干扰。用 GlySERIAS 冻干液过夜消化产生 2 个 Fc/2 变体，分别剩下 4 个和 1 个甘氨酸残基。根据消化时间的不同，使用冻干产物释放的肽以五或七种变体存在，接头中残留的甘氨酸残基数量不同，而使用固定化产物释放的肽以四种变体存在。Genovis提供具有低水平内du素的FabRICATOR （IdeS）冻干。山西GlySERIASIdeS蛋白酶IgG特异性蛋白酶

GingisKHAN Fab Kit进行人IgG1（如曲妥珠单抗）的消化和抗体片段的后续纯化。湖南FabALACTICAIdeS蛋白酶蛋白组学

Genovis将固定化酶固定在磁珠上，用于在铰链下方自动消化IgG。FabRICATOR（IdeS）是一种IgG特异性半胱氨酸蛋白酶，可消化铰链下方单个氨基酸位点的抗体，产生均质的F（ab'）2和Fc片段。FabRICATORMagIC磁珠含有FabRICATOR固定化酶。这些微球能够在中级表征工作流程中并行快速自动酶解多种抗体。它们专为自动化平台而设计，但在无法实现自动化的情况下，在振动台上的表现同样出色。酶切消解后，样品可直接转移到LC-MS的自动进样器进行快速色谱分析，或转移到其他分析方法进行分析。自动平行抗体酶切和亚基生成允许处理与克隆选择、工艺开发和潜在生物制药稳定性研究相关的大量样品。自动抗体亚基分析可减少操作人员的时间和样品处理错误的风险，并提高通量。湖南FabALACTICAIdeS蛋白酶蛋白组学