制备脂质体载药siRNA
阴离子脂体由带负电荷的脂质组成,如磷脂酰甘油、磷脂酰丝氨酸和磷脂酸,由于它们被巨噬细胞摄取,循环时间缩短。带负电的小脂质体比其对应的中性和带正电的脂质体被***得更快。此外,在带负电荷的小脂质体中观察到一种双相***模式。 另一方面, 与中性和带正电的脂质体相比, 血液单核细胞和肺在带负电的大脂质体的摄取中起主要作用。表面修饰的脂质体(携带配体)比天然脂质体更容易被***。 然而, 脂质体通过掺入胆固醇可在一定程度上减少肝脏对脂质体的摄取, 这可能会使磷脂包装转变为更坚硬有序的膜。被动载药⽅法是在脂质体制备过程中对药物进⾏包封的方法。制备脂质体载药siRNA
脂质体靶向递送中甘露糖配体修饰由于在巨噬细胞上发现了甘露糖受体,因此甘露糖已被用于修饰阳离子脂质体以供巨噬细胞递送。为了抑制由活化的巨噬细胞诱导的破骨细胞生成,将甘露糖基化阳离子脂质体与双链寡核苷酸NFkB诱饵络合。甘露糖阳离子脂质体/NFkB诱饵复合物有效诱导NFkB活化并抑制肿瘤坏死因子-a的产生。在另一项研究中,巨噬细胞靶向NFkB诱饵装载在甘露糖基化阳离子脂质体中,用于预防脂多糖诱导的肺部炎症。气管内给药后,甘露糖标记的阳离子脂质体/NFkB诱饵复合物***下调NFkB的表达,减少肿瘤坏死因子-a和白细胞介素-1b的释放。研究人员研究了茴香酰胺修饰的阳离子脂质体将寡核苷酸靶向递送至表达sigma受体的细胞的能力。剪接开关寡核苷酸(SSOs)是一种单链寡核苷酸,可与剪接位点或剪接增强子结合,阻断内源性剪接机制的通路,并产生成熟mRNA的替代版本。在肺转移小鼠模型中,全身给药装载Bcl-xSSO的茴香胺修饰阳离子脂质体可降低**生长。载药脂质体载药荧光阳离子脂质体递送化药和核酸的优势。
脂质体成分配比脂质体是由多种组分构成的,
主要包括:1.磷脂质:是脂质体**主要的组分,构成了脂质双层结构的主体。磷脂质包括磷脂、甘油磷脂、胆固醇等,它们在水性环境中通过亲水头部和疏水尾部的相互作用形成了双层结构。2.胆固醇:在脂质体中扮演着调节脂质双层流动性和稳定性的重要角色。胆固醇可以调节磷脂质的包装密度,增强脂质体的机械稳定性。3.表面活性剂:通常用于稳定脂质体的水合壳,并且有助于脂质体的稳定分散在水相中。常见的表面活性剂包括辛酸单酯类、磺酸盐类等。4.PEG衍生物:如前面所述,聚乙二醇(PEG)衍生物可以修饰脂质体表面,增强其稳定性、延长血液循环时间和降低免疫原性。5.药物或其他活性成分:脂质体通常被设计用来载药或其他活性成分,这些物质可以被包裹在脂质体内部,通过脂质双层的特性来实现针对性的释放或传递。DepoCyte、DepoDur和Exparel具有特殊的结构和相似的脂质成分。MVLs的形成⾄少需要两种类型的脂质:两亲性脂质和中性脂质(如双⽢油酯、⽢油三酯、植物油)。
脂质体成功降低了绿色荧光蛋白(GFP)的表达,并在H4II-E和HepG2细胞中显示出较低的细胞毒性。在其他研究中,精氨酸衍生物N,N-distearyl-N-methyl-N-2-(N’-arginyl)aminoethylammoniumchloride被用于阳离子脂质体与胆固醇的配制。将这些离子脂质体与c-MycsiRNA络合,并静脉注射给B16F10黑色素瘤小鼠(1.2mg/kg,每天1次,连续3天),导致B16F10**对紫杉醇增敏。另一项研究建议使用精氨酸基DiLA2脂质作为载脂蛋白b特异性siRNA递送的阳离子脂质体组分。经小鼠静脉给药(ED50,0.1mg/kg)后,DiLA2和DOPE制备的阳离子脂质体显示出抑制肝脏载脂蛋白BmRNA表达的潜力。单次全身给药后,在给药后第2天观察到目标mRNA水平的比较大减少(约80%),并且目标mRNA的减少持续到给药后第9天。脂质体质量控制主要包括原材料质量控制、制备工艺参数控制产品特性测试、微生物污染控制和质量标准建立等。
siRNA脂质体
RNA干扰(RNAi)途径允许siRNA和miRNAs负向调节蛋白表达。siRNA是21~23对核苷酸组成的双链RNA,可诱导同源靶mRNA沉默。为了发挥作用,双链siRNA分裂成两个单链RNA:乘客链和引导链。乘客链被argonaute-2蛋白降解,而引导链则被纳入RNAi诱导的沉默复合体中,该复合体结合与引导链互补的mRNA并将其切割。siRNA似乎具有***多种疾病的巨大潜力,因为它们可以很容易地下调各种靶mRNA,而不考虑它们的位置(即在细胞核或细胞质中),并且它们的特异性结合表明它们比传统化学药物诱导的副作用更少。作为一种新型的基于核酸的***策略,siRNA***与传统的化学药物相比具有许多优势。然而,为了促进基于siRNA的***方法的发展,必须克服一些挑战,包括需要识别适当的靶基因和开发优化的递送系统。许多研究人员试图利用阳离子脂质体提高siRNA的细胞递送和基因沉默效率。例如,由DC-6-14、DOPE和胆固醇组成的阳离子脂质体被用于递送萤火虫荧光素酶特异性的siRNA。当阳离子脂质体与siRNA持续剧烈搅拌混合时,转染效率提高,说明将siRNA加载到阳离子脂质体上的方法可以调节转染效率。siRNA脂丛的***应用因靶蛋白而异。 脂质体的载药率怎么计算。石家庄脂质体载药抗体
脂质与生物活性小分子(如叶酸)的结合已被研究用于靶向递送核酸。制备脂质体载药siRNA
脂质体核酸疫苗核酸***剂是一类新兴的药物,显示出***各种疾病的潜力。然而,由于核酸是多价阴离子和高度亲水分子,它们几乎不被细胞吸收。它们也很容易被血液中的核酸酶降解。因此,它们需要一种传递载体才能进入细胞并发挥作用。LNP载体是核酸类药物的成功载体之一。核酸药物Patisiran(ONPATTRO)是一种在LNPs中配方的siRNA,用于减少肝脏中甲状腺素转运蛋白的形成,**近获得FDA批准用于***遗传性甲状腺素转运介导的淀粉样变性。它是**早获批的siRNA药物,也是**早的lnp配方核酸药物,标志着核酸***学发展的一个重要里程碑。COVID-19mRNA疫苗中的LNPs。LNPs的***成功应用是辉瑞/BioNTech和莫当纳**近批准的两种COVID-19信使RNA(mRNA)疫苗的递送载体,这两种疫苗的开发速度****,在疾病预防方面显示出显着的效果。疫苗将编码SARS-CoV-2刺突蛋白的mRNA送入宿主细胞细胞质;mRNA被翻译成刺突蛋白,刺突蛋白作为抗原,导致对病毒产生免疫反应。两种mRNA疫苗的脂质纳米颗粒的组成非常相似。制备脂质体载药siRNA
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