四川组织免疫组化要多久
免疫组化有哪几种分类 ?
1)按标记物质的种类,如荧光染料、放射性同位素、酶(主要有辣根过氧化物酶和碱性磷酸酶)、铁蛋白、胶体金等,可分为免疫荧光法、放射免疫法、免疫酶标法和免疫金银法等。
2)按染色步骤可分为直接法(又称一步法)和间接法(二步、三步或多步法)。与直接法相比,间接法的灵敏度提高了许多。
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3)按结合方式可分为抗原-抗体结合,如过氧化物酶-抗过氧化物酶(***)法;亲和连接,如卵白素-生物素-过氧化物酶复合物(ABC)法、链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结(SP)法等,其中SP法是比较常用的方法;聚合物链接,如即用型二步法,此方法尤其适合于内源性生物素含量高的组织抗原检测。 免疫组化怎么做?步骤方法?四川组织免疫组化要多久
医疗和预后有关的免疫组化。与医疗及预后有关的标记物主要分以下为三类:(1)cancer基因标记物:如cancer基因C-erbB2、c-myc、P53蛋白等,卵巢上皮性cancer中P53的过表达与cancer的扩散、分化、术后残存cancer灶呈正相关;乳腺cancer中表达C-erbB2的浸润性cancer患者预后差;肺cancer中突变型P53基因蛋白表达增高,PTEN基因表达减弱,提示cancer预后不良。(2)细胞增殖性标记物:cancer细胞增生是否活跃直接影响着临床的医疗与预后,如表皮生长因子受体(EGFR)、Ki-67、PCNA、cycling等可对cancer细胞的增生做出评价,表达指数越高,表明其增殖指数越活跃,恶性度增高,预后不良,其中以恶性淋巴瘤乳腺cancer较为明显;在对乳腺cancer的研究中发现Ki-67、EGFR阳性者,淋巴结转移率高,并与ji素受体的表达呈负相关。(3)类固醇ji素受体:如雌ji素受体(ER)、孕ji素受体(PR)等,应用更为范围广的的是子宫内膜cancer及乳腺cancer,如对乳腺cancer中ER、PR的检测,有助于决定临床医疗中是否需要加入内分泌ji素阻断医疗,并能判断预后,ER及PR阳性表达、原cancer基因(C-erbB-2)阴性表达病例对三苯氧胺等ji素医疗反应良好,而ERPR、C-erbB-2三种抗体均阴性(TNBC)患者采用三苯氧胺可能意义不大。四川组织免疫组化要多久免疫组化的样本保存要求是什么?
免疫组化的特点:
1)特异性强。免疫学的基本原理决定抗原与抗体之间的结合具有高度特异性,因此,免疫组化从理论上讲也是组织细胞中抗原的特定显示,如角蛋白(keratin)显示上皮成分,LCA显示淋巴细胞成分。只有当组织细胞中存在交叉抗原时,才会出现交叉反应。
2)敏感性高。在应用免疫组化的起始阶段,由于技术上的限制,只有直接法、间接法等敏感性不高的技术,那时的抗体只能稀释几倍、几十倍;现在由于ABC法或SP三步法的出现,使抗体稀释上千倍、上万倍甚至上亿倍仍可在组织细胞中与抗原结合,这样高敏感性的抗体抗原反应,使免疫组化方法越来越方便地应用于常规病理诊断工作。
3)定位准确、形态与功能相结合。该技术通过抗原抗体反应及呈色反应,可在组织和细胞中进行抗原的准确定位,因而可同时对不同抗原在同一组织或细胞中进行定位观察,这样就可以进行形态与功能相结合的研究,对病理学领域开展深入研究是十分有意义的。
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做免疫组化时如何选择一抗?
1、单克隆和多克隆抗体的选择。由一种克隆产生的特异性抗体叫做单克隆抗体。单克隆抗体能目标明确地与单一的特异抗原决定簇结合,就像导弹精确地命中目标一样。另一方面,即使是同一个抗原决定簇,在机体内也可以由好几种克隆来产生抗体,形成好几种单克隆抗体混杂物,称为多克隆抗体。在抗原抗体反应中,一般单克隆抗体特异性强,但亲和力相对小,检测抗原灵敏度相对就低;而多克隆抗体特异性稍弱,但抗体的亲和力强,灵敏度高,但易出现非特异性染色(可以通过封闭等避免)。
2、应用范围的选择。有的一抗只能用于Westernblotting,或免疫组化、免疫荧光、免疫沉淀等;甚至标明石蜡切片或冰冻切片。
3、种属反应性的选择(speciesreactivity)。这一点很重要,表明这种抗体可能存在种属差别,且这种抗体适合检测哪种种属动物体内的抗原。
4、种属来源,一般兔来源的多是多克隆抗体;而小鼠来源的多是单克隆抗体,但也有另外。根据此来源来选择相应的二抗。
5、生产厂家的选择。
做免疫组化意味什么?
免疫组化的局限性:在病理诊断中,随着各种抗体新的用途不断被发现及越来越多的新型抗体的出现,免疫组化在病理诊断和医疗中已有了很重要的位置,对于cancer诊断、鉴别诊断、分类及诸多方面产生了重大的影响。但是免疫组化技术还存在着缺陷和不足,作为病理医生和病理技术人员不仅要充分认识到缺陷和不足,而且要努力避免由于缺陷和不足给诊断带来的误区,这就要求病理医生和病理技术人员在工作中不断学习与研究,在实际操作中总结经验教训,分析失败原因,努力实现操作规范化、标准化,才能充分发挥免疫组化在病理诊断及鉴别诊断、临床医疗中的指导作用。动物、细胞的免疫组化、免疫荧光,就找英瀚斯生物!内蒙古什么是免疫组化注意事项
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免疫组化(IHC)利用抗体检测组织切片中蛋白质和其他抗原的定位。
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抗体-抗原的相互作用通过有色酶底物显色检测或荧光染料荧光检测进行观察。虽然IHC在定量方面不如蛋白质印迹或ELISA,但是IHC可以提供完整组织中蛋白定位的宝贵信息。蛋白表达谱对病理学家以及作为诊断工具都具有重要意义。
IHC实验成功的关键在于稳定、优化且可重复的染色方案,而该方案应使用高质量的特异性试剂。 四川组织免疫组化要多久
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