Tris-MOPS-SDS电泳粉剂(1×)

检测试剂盒样品收集: 细胞培养上清：取细胞培养上清于1000×g离心20分钟，除去杂质及细胞碎片。取上清检测。其它生物样品：1000×g离心20分钟，取上清即可检测。样品应清澈透明，悬浮物应离心去除。样品收集后若在1周内进行检测的可保存于4℃，若不能及时检测，请按一次使用量分装，冻存于-20℃(1个月内检测)，或-80℃（6个月内检测），避免反复冻融。如果您的样品中检测物浓度高于标准品高值，请根据实际情况，做适当倍数稀释（建议先做预实验，以确定稀释倍数）。从试剂瓶取用试剂，用左手持量筒（或试管），并用大姆指指示所需体积刻度处。Tris-MOPS-SDS电泳粉剂(1×)

加药时间:由于基因转染到细胞内之后要一段时间才能表达出蛋白质。所以筛选不能太早；但是也不能太晚，因为转染了外源基因的细胞代谢负荷较大，增值较慢，时间长了就会被没有外源基因转入的细胞所淹没，终导致筛选不出阳性克隆，一般要在转染24小时之后才开始加G418筛选。随着细胞的代谢G418的浓度和活性都回下降，所以每3~5天都要更换一次含有G418的筛选液。这时药物浓度可以降至200ug/ml。培养液:加药筛选约6天左右，细胞会大量死亡，孔中只剩下的细胞。这时会出现两个问题：1.死亡的细胞会裂解释放出有害物质，导致那些有neo表达的阳性细胞死亡，即非选择性死亡。2.孔中细胞数目很少，细胞之间的信号会变得很弱，也会导致阳性细胞的状态不佳甚至死亡。这个时候需要一种特殊的培养液：假如你要转染3T3细胞，在3T3细胞汇合度达到80%的时候，换液，培养过夜之后收集培养液，通过滤器消毒，和新鲜的培养液按1：1混合备用。再转染后筛选过程中就可以应用这种培养基。PbN滴定液(0.05mol/L)注意事项：避免反复冻融。

检测检测试剂盒注意事项：检测试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排加样。 请每次测定的同时做标准曲线，做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔*孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请后乘以总稀释倍数（×n×5）。

如何判断是否是基质效应呢？第一种方法是采用线性稀释，一般来讲，抗原和捕获抗体、检测抗体之间的结合作用很强，样品浓度被稀释并不影响它们的结合，而造成基质效应的非特异结合的力要弱很多，如果不断稀释样品，非特异结合造成的干扰会逐步减少，测量值也更接近真实值。没有基质效应时，无论如何稀释，测量值都和真实值吻合。而有基质效应时，稀释会造成非特异性结合比例的减少，测量值也相应地产生很大改变。第二种方法是掺入回收率实验，将低、中和高浓度的分析物掺入到已测定过浓度的样本中，掺入前后实测到的浓度增加部分与掺入浓度之比就是回收率，回收率以百分比的形式呈现。回收率介于80-120%，才符合标准。注意事项：尽注意无菌操作，避免污染。

检测试剂盒具有灵敏、特异、简单、快速、稳定及易于自动化操作等特点，而且因为一日之内能够检查几百乃至上千份标本，因此在生物医学各领域的使用规模日益扩展。在检测试剂盒中一般有3次加样步聚，即加标本，加酶结合物，加底物。加样时应将所加物加在检测试剂盒板孔的底部，防止加在孔壁上部，并注意不行溅出，不行产生气泡。加标本一般用微量加样器，按规则的量参加板孔中。每次加标本应更换吸嘴，以免发作交叉污染，也可用一次性的定量塑料管加样。检测试剂盒吸入液体时的的方法是吸两档打一档。醋酸-醋酸钠缓冲液（pH3.8）

检测试剂盒在每次抗体或抗原孵育后重复洗刷三次。Tris-MOPS-SDS电泳粉剂(1×)

淋巴细胞分离液：淋巴细胞分离液是一种根据细胞密度差异，借助离心产生的重力加速度，进行细胞的分离纯化的常用试剂。常用的淋巴细胞分离液有Ficoll淋巴细胞分离液、Percoll淋巴细胞分离液。Ficoll与Percoll分离单个核细胞的方法均为密度梯度离心法。分离原理：外周血中单个核细胞和单核细胞,其体积、形态和密度与其他细胞不同，淋巴细胞分离液是一种密度介于1.075~1.090之间而近似于等渗的溶液,用它做密度梯度离心,使一定密度的细胞按相应密度梯度分布，从而将各种血细胞加以分离。淋巴细胞分离液Lymphocyte Separation Medium（human, Ficoll-Paque ）是世界范围内用于体外研究分离人淋巴细胞的实验室公认的标准。Tris-MOPS-SDS电泳粉剂(1×)