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进行引物设计：首先先选上游前20个碱基，点击“Primers”→“addprimer”，在弹出的选项框中选择“TOPstrand”更改上游primer的名字以及添加酶切位点序列（百度或用snapgene软件打开载体序列均可查找到内切酶对应的切割序列）和保护碱基的序列。-生命科学软件然后点击“Addprimertotemplate”选择下游20个碱基，点击“Edit”→“copybottomstrand”，选择“5’→3’”-生命科学软件点击“Primers”→“Addprimer”，在弹出的选项框中点击右上角的×，直接关闭。苏州中文支持生命科学软件多少钱生命科学分析软件 | SAS。

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